2019-nCoV新型冠状病毒检测实验中需要使用的实验用品清单参考

疫情期间，在各类新型冠状病毒检测方法中，咽拭子-试剂盒检测因其操作方便、不需要其他设备，成本相对较低，是目前最主要的检测方法。对于样本的核酸检测，常见有手工和全自动工作站，相对手动，工作站效率更高，更适合多样本。以下我们将简单介绍一下检测流程，在此过程中，耐思可以提供哪些在耗材方面的协助，让大家更直观的了解耐思的产品。

 样本的采集

“巧妇难为无米之炊”，样本采集是所有检测的第一步。疫情爆发后，耐思快速研发出一次性样品采集器，成功取得相关医疗资质，并迅速投入生产，保障前线所需。
 

 

一次性使用采样器
 

该产品可用于新冠肺炎的口咽样品采集，医院、疾控中心等单位需求量大，目前NEST一次性采样器已取得相关医疗资质并投入生产，库存充足，物流迅速，如有需求可联系耐思销售咨询购买。

试剂盒核酸检测流程

对于新冠病毒的核酸检测步骤，参考了北京协和医院感染内科韩扬副研究员发表的流程解析，向奋战在一线的医护人员致敬！

1、样本的灭活处理

两名完成三级防护的工作人员，进入样本处理区或样本处理专用实验室，将接收到的样本二级包装在安全柜内打开，检查样本主容器是否为严格密闭；对密封袋表面进行消毒后，对送检样本进行56℃下30分钟的灭活，灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最内层的容器，将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。

2、手工核酸提取操作流程（以科智达恒温荧光检测法试剂盒为例）
（1）试剂配制 (在试剂准备区进行)

在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的普通试剂配制实验室中，将试剂盒中所需组分解冻，振荡混匀并短暂离心后备用。根据所检测的样本数量按照：缓冲液21.9μL，DNA聚合酶1μL，AMV逆转录酶0.1μL配制反应液，建议每次检测均设置阴性对照和阳性对照。将配制好的反应体系混匀后，按23μL量分装到PCR 反应管，转移至样本处理区。
 

（2）加样（样本处理区）

分别向不同管中加入2μL的阴性对照、样本核酸提取液、阳性对照，终体积为25 μL/管，再分别加入25μL密封液，盖紧反应管，瞬时低速离心，转移至检测区，以备PCR检测使用。
 

 

NEST 微量离心管系列
 

NEST 吸头系列
 

NEST 高速离心机
 

（3）采用核酸提取仪提取核酸的操作流程

因为不同品牌的工作站不同，所以没有很统一的操作方法，根据核酸提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，并按照要求回收提取好的核酸备用。今天我们就选取市面上常用的几款工作站为例，介绍一下耐思可以提供哪些产品。自动工作站用的最多的，莫过于吸头，耐思除了常规吸头外，我们又推出了新品导电吸头。
 

 

 

  

深孔板系列，可以结合排枪、高通量自动液体操作仪器和软件，实现对生物样品的高通量操作。
 

（4）PCR体系的配制、模板加样及上机

在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的专用实验室，配制PCR体系。根据试剂盒说明书的要求，将试剂盒的不同组分（一般包括反应液、酶、引物等）按照各自必须的体积量进行配制混合，充分混匀并离心后，通过传递窗传递到核酸提取和加样区，或由专人从试剂配制实验室送至核酸提取和加样专用实验室。在加样专用生物安全柜内，根据检测样本例数分装体系到每个反应管中，逐一将样本核酸加入到对应的反应管中，并加盖密闭好PCR反应管；每批次检测需要做一个阳性对照和3个阴性对照。
 

 

PCR 八连管系列
 

PCR 单管
 

在扩增区或专用扩增实验室，由专人取出配制好的PCR检测管，混匀、离心后，小心上机检测，按照试剂盒说明书设置扩增参数并分析判读结果。进行结果分析时，应认真阅读试剂盒说明书，在了解该试剂盒的灵敏度、检测方法和局限性等技术特点的基础上，结合该批次阴性质控的结果，综合判读样本的检测结果。检测结束后，为防止可能的扩增污染，扩增结束后的PCR管严禁开盖或带离扩增实验室，应尽快通过可密封塑料袋等容器盛装密闭后，放入指定专用医疗垃圾桶中做进一步处理。
 

 

八连管盖
 

（5）全自动核酸检测仪

此类检测集样本加载、核酸提取、PCR体系构建等诸多功能于一体，可实现全流程自动化操作，彻底将您从繁琐的手动操作中解放出来。
 

 

其他品牌核酸工作站，需要适配各类PCR耗材，如0.1ml和0.2ml八连管、96孔板等。
 

 

（6）废弃物的处理

对检测完成后的疑似病人样本采用双层塑料袋密封；对实验过程中产生的废液和枪头等置于含0.5%～1%有效氯的含氯消毒液的废液缸。上述物品经压力蒸汽灭菌处理。详见《新型冠状病毒实验室生物安全指南》（第三版）。

重要提醒：鉴于2019新型冠状病毒具有高度传染性，检验人员应在二级生物安全环境进行检测，个人防护按照三级生物安全要求。为避免人员感染、实验交叉污染及阳性品气溶胶污染，建议将以上设备放入生物安全柜中并全程在生物安全柜中进行实验操作，同时建议条件允许的情况下可对所采集样本进行56℃ 30min灭活处理后进行核酸提取和后续检测。

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