构建嵌合抗原受体(CAR)候选分子时选择合适抗原结合域的考虑因素
嵌合抗原受体（CAR）是CAR-T/NK细胞的核心所在。一般由胞外抗原结合区（通常为scFv）、跨膜区以及胞内信号传导区构成。CAR候选分子具备特异性识别肿瘤细胞表面抗原的能力，能让CAR-T/NK细胞及其他经CAR修饰的免疫细胞精确地瞄准肿瘤细胞，从而降低对正常细胞的损害。当CAR候选分子与肿瘤抗原相结合后，会激活免疫细胞内的信号传导途径，推动免疫细胞发挥杀灭肿瘤细胞的功效。通过选取适宜的CAR候选分子，能够增强免疫细胞的活化与增殖能力，提升抗肿瘤免疫反应的成效。总之，CAR候选分子在肿瘤免疫治疗中占据着举足轻重的地位，为实现精准、高效的肿瘤治疗奠定了重要基石。
选择合适的抗原结合域是构建CAR候选分子的关键步骤之一，需要考虑以下几个方面：
肿瘤特异性：抗原结合域应能够特异性地识别肿瘤细胞表面的抗原，而与正常细胞的交叉反应最小化。例如，对于某些血液肿瘤，CD19是一个较为理想的靶点，因为它在B细胞恶性肿瘤中高表达，而在正常造血干细胞中不表达。
亲和力和特异性：选择具有高亲和力和特异性的抗原结合域，以确保CAR-T/NK细胞能够有效地识别和结合肿瘤细胞。可以通过噬菌体展示、酵母展示或其他技术筛选出具有所需特性的单链抗体片段（scFv）。
抗原表达水平：考虑肿瘤细胞表面抗原的表达水平。理想的抗原应该在肿瘤细胞上高表达，以增加CAR-T/NK细胞与肿瘤细胞的结合机会。例如，在某些实体瘤中，HER2等抗原的表达水平可能因肿瘤类型和个体差异而有所不同，因此需要选择在特定肿瘤中高表达的抗原作为靶点。
肿瘤异质性：肿瘤细胞往往具有异质性，即不同的肿瘤细胞可能表达不同的抗原。因此，选择的抗原结合域应能够识别多种肿瘤细胞亚群，以提高治疗的效果。例如，在黑色素瘤中，除了常见的靶点如NY-ESO-1外，还可以考虑其他肿瘤相关抗原，以应对肿瘤的异质性。
免疫原性：尽量选择免疫原性较低的抗原结合域，以减少机体对CAR-T/NK细胞的免疫排斥反应。一些人源化或全人源的抗体片段可能具有较低的免疫原性。
临床前研究数据：参考已有的临床前研究数据，了解不同抗原结合域在动物模型中的疗效和安全性。这些数据可以为选择合适的抗原结合域提供重要的参考依据。
为了助力CAR候选分子的筛选，加速细胞治疗研发进程，逐典生物精心打造CAR候选分子开发解决方案，服务包括scFv/sdAb 抗体发现与优化、细胞因子序列设计及转让授权，助推您快速顺利获得具有合适亲和力和高特异性的人源化CAR候选抗体分子和具有特定功能的细胞因子序列。
scFv/sdAb候选分子开发服务
为了快速且高性价比地获得合适亲和力的CAR候选分子，逐典生物采用噬菌体筛选的方式进行CAR候选分子的筛选，噬菌体筛选具有以下显著优势：
高效性：能够在短时间内从庞大的抗体库中筛选出目标分子。
特异性强：可以精确地识别和筛选出针对特定抗原的分子。
库容巨大：能够构建包含数十亿甚至更多不同 scFv 的噬菌体库，大大增加了找到理想抗体的可能性。
易于操作和改造：筛选过程相对简便，并且可以通过基因工程技术对噬菌体进行修饰和优化。
成本相对较低：相较于其他一些筛选技术，噬菌体筛选所需的试剂和设备成本较为经济实惠。
可重复性好：只要遵循相同的操作流程和条件，就能够获得较为稳定和可重复的筛选结果。
服务流程
以scFv为例，首先构建噬菌体抗体库：逐典生物拥有全面的免疫原设计&制备平台以及独有的六聚体免疫技术，可以显著增强动物免疫效果，提高免疫效价，为构建高库容的噬菌体展示文库打下坚实的基础。从经过免疫的小鼠或羊驼中获取淋巴细胞，提取RNA并反转录为cDNA，通过PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因，将其连接成单链抗体片段基因并插入噬菌体载体，之后利用目标抗原对噬菌体进行多轮筛选和淘洗，获得目标分子。逐典生物可提供灵活的体外效价检测方案和BLI/SPR亲和力排序，确保筛选到合适的分子序列。之后根据具体项目需求进行抗体片段化，人源化基因改造和抗体亲和力成熟，重组表达之后交付纯化抗体。
服务详情
CAR候选分子人源化案例分享
项目目的：对筛选到的原始序列进行人源化改造，要求同时获取亲和力保持和亲和力降低的人源化序列
项目结果：在客户要求的交付时间内，成功交付亲和力保持和亲和力降低的人源化序列。
细胞因子序列转让&开发服务
为增强CAR-T细胞疗法的效果，一系列创新的CAR设计应运而生，旨在强化抗肿瘤的效率，克服因CAR-T细胞扩增、浸润和持久性欠佳而产生的治疗耐药性。在此背景下，第四代 CAR（即装甲型 CAR）正在积极研发之中，它整合了细胞因子（像 IL-7、IL-15 或者 IL-21 等），用以提升CAR-T细胞的持久性、肿瘤靶向性以及抗肿瘤能力。另外，还有一种策略是通过让CAR-T细胞表达趋化因子受体或者趋化因子（比如 CCL19、CCL21）来对其进行修饰，引导CAR-T细胞到达肿瘤所在部位。
然而，野生型的细胞因子的一些短板比如无偏向性、构象不稳定等限制了细胞激活、扩增的效果甚至是第四代CAR-T分子的构建。为了解决野生型细胞因子的难题，逐典生物依托AI蛋白设计和表达平台，提供定制化细胞因子开发和表达服务。此外，逐典生物已对部分常用的野生型的细胞因子序列进行改造，比如，改造后的IL-15 Pro相比野生型，活性可提高20倍。改造后的IL-2 Pro可实现偏向性地结合不同的IL-2受体，从而优先激活CD8+T细胞或者优先激活Treg细胞，可有效调控免疫细胞的应答。
