分子相互作用相互仪在小分子药物与人血清白蛋白相互作用方面的应用

简介
       人血清白蛋白(HSA)是血浆中最重要的蛋白质，其含量丰富。HSA的主要功能是携带脂肪酸和维持血液胶体渗透压，是许多激素和药物尤其是疏水药物的重要载体。药物与HSA结合增加了药物的半衰期，降低了血液中游离药物的浓度，对临床护理具有极其重要的意义。在药物发现早期，确定血浆蛋白结合是很重要的，因为它用于评估药物的剂量需求和从体内的清除。
 
材料和方法
       羧基甲基葡聚糖(CMD)包被的传感器载玻片通过胺偶联化学固定HSA(图2)。固定在21°C下进行，使用5 mM MES (2-(N-morpholino)乙磺酸)pH 5.0作为运行缓冲液。表面用EDC/NHS活化，用5mM乙醇胺(pH 8.0)灭活。        采用SPR Navi 220A型仪器测定小分子药物吲哚美辛、奎尼丁和萘普生(357.8、324.4和230.3 g/mol)与固定化HSA的相互作用。实验采用pH为7.4的PBS(磷酸盐缓冲盐水)作为运行缓冲液，温度为21℃。测量5个样品浓度系列(0.1 ~ 50 μM)。奎尼丁是较弱的结合剂，因此测定了较高的浓度(10 ~ 500 μM)。样品中含有3%的二甲基亚砜(DMSO)，以提高药物的溶解度。用TraceDrawer分析了反应的动力学和亲和性。

结果和讨论
       根据BioNavis固定方案，成功重复多次固定化HSA。传感器表面固定HSA的平均量为2000 ng/cm²。通过MP-SPR测量，成功测定了三种小分子量药物对HSA的稳态亲和力和结合动力学(表1)。吲哚美辛的亲和力图和动力学分析如图3和图4所示。分别测定两次奎尼丁的结合度，得到的等结合值证实了结果的重复性。
 
结论
       MP-SPR仪器是测量小分子直接亲和力的优良工具。通过仪器的实时和无标签测量，不仅可以有效地确定结合的稳态，还可以有效地确定结合的动力学。这些类型的测量可用于临床前药物筛选和生化药物开发。