细胞消化的关键技术要点

浏览次数：1080　发布日期：2024-5-13　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

一，细胞润洗次数

绝大部分细胞用胰酶润洗一次即可

胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上与培养皿壁结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时，细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力可成为球形。

由于在细胞培养中，胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。胰酶作用时间过长、作用次数过多，都容易破坏细胞表面结构。

在吸去培养基后，用37℃预热过的PBS润洗细胞表面1-2次，随后加入适量胰酶，以能够平铺在器皿底部一层，略盖过细胞为原则。可放入37℃培养箱中孵育1-2分钟。

二，何时终止消化

贴壁细胞层呈流沙状可移动即可终止消化

有不少细胞培养人员，喜欢把全部细胞，消化成间隔分布很离散的单个圆形的细胞，但实际上，此时的细胞已经处于“消化过度”的状态了。

因此，肉眼观察下，50%左右细胞呈现流沙状，或镜下观察细胞质回缩，细胞之间不再连接成片，即可加入胰酶2-3倍体积的含血清培养基，终止消化。

逐典TrypLUS消化液是一种胰蛋白酶类似物（Trypsin Like Enzyme），是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶，与胰蛋白酶有相似的解离动力学，稳定性更高，纯度更好，消化更温和，细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中，可以在赖氨酸和精氨酸的C末端切割肽键，可以替代猪或牛胰蛋白酶（Trypsin）对贴壁细胞的消化解离。生物制药中，GMP级别的TrypLUS能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。