非限制性体干细胞（USSCs）的分离

非限制性体干细胞（USSCs）的分离

试剂和材料： 
1. 起始培养基；
2. 扩增培养基；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. PBSA；
5. T25培养瓶；

实验方法：
1. 制备和分离脐带血来源的MNCs（CB-MNCs）；
2. 如果使用冻存的CB-MNCs，复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤；
3. 用起始培养基按5×10⁶ —7×10⁶个细胞/ml浓度接种到T25的培养瓶中；
4. 将细胞放在37℃，5%CO_²的条件下培养，2-4周内每周一次更换培养基和细胞因子；
5. 形成USSC集落后，在扩增培养基中扩增细胞；
6. 将细胞放在37℃，5%CO_²的条件下培养；
7. 到达80%汇合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化细胞，并按1：3比例传代，在相同培养条件下继续培养；