CKX53倒置荧光显微镜Calcein AM-PI活死细胞双染检测方案
| 解决方案 / 细胞活力评估指南 CKX53 倒置荧光显微镜 Calcein AM / PI 活死细胞双染检测方案 |
| SECTION 01 | 检测原理与荧光探针机制 |
| 荧光染料 | 细胞穿透性 | 作用机制与靶点 | 光谱匹配与通道 |
| Calcein AM (黄绿荧光) |
透膜型 (质膜透过) |
活细胞内源性酯酶剪切产生强负电荷 Calcein，保留于胞质发出强绿光 | Ex: 494 nm / Em: 517 nm (匹配 FITC/GFP 通道) |
| Propidium Iodide (PI) (红色荧光) |
非透膜型 (仅死细胞膜受损) |
穿透受损质膜与双链 DNA 嵌合发出强红色荧光，特异性标记死细胞 | Ex: 535 nm / Em: 617 nm (匹配 TRITC/Cy3 通道) |
| SECTION 02 | CKX53 显微硬件架构与技术支撑 |
配备多达 5 个观察通道，LED 集成光源发光稳定无预热，配合高透过、高截止度滤色镜组，实现弱荧光信号下的高信噪比成像。
2. 遮光板（Lighting Shield）明亮环境观察设计
专有遮光板可阻挡环境杂散光，实验人员无需在黑暗暗室中操作，在普通明亮实验室即可采集高反差荧光图像。
3. 人体工程学与无菌超净台高度契合
机身重约 7kg，表面防紫外涂层，可直接置入超净工作台通过紫外灯消毒。45 度倾斜光路使快速调焦与采样更为自然顺畅。
| SECTION 03 | 5 步标准化操作流程指南 |
| ⚡ STEP 01 | 工作液配置与样品洗涤 | 将 Calcein AM 与 PI 用无血清培养基稀释（Calcein AM 约 2 μM，PI 约 4 μM）；样品用 PBS 洗涤 1-2 次清除血清干扰。 |
| ⚡ STEP 02 | 细胞染色与孵育 | 加入双染工作液，置于 37°C、5% CO₂ 培养箱避光孵育 15–30 分钟。 |
| ⚡ STEP 03 | 快速上样与相衬定位 | 样品置于载物台，开启 LED 明场，利用 iPC 整合相衬系统（4X–40X 免换环）快速锁定视野对焦。 |
| ⚡ STEP 04 | 双色荧光成像采集 | 展开遮光板，切至 FITC 通道采集活细胞黄绿荧光，控制按钮切至 TRITC 通道采集死细胞红荧光。 |
| ⚡ STEP 05 | 图像融合与定量评估 | 借助相机控制软件进行通道叠加，计算活细胞率与死细胞比例。 |
| SECTION 04 | 典型图像结果与评估 |
| SECTION 05 | 实验注意事项与设备维护 |
📌 激发光调控：利用 LED 多档调控适度降低激发功率，延长荧光抗淬灭时间。
📌 消毒与清洁：超净台紫外消毒前盖好镜头罩；机身沾染培养基用 75% 乙醇湿润无尘纸擦拭。
