生物抗体应用与注意事项

生物抗体应用

标记蛋白质氨基的活化生物素：N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）。

标记蛋白质醛基的活化生物素：酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）。

标记蛋白质巯基的活化生物素：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）。

标记蛋白质核酸的活化生物素：常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和BHZ。

生物抗体的常识问题

活化生物素通过侧链与蛋白分子连接；

一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性；

对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记微酸性抗原；抗原、抗体标记后活性不变；

可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后活性将降低；

生物抗体标记蛋白质：

根据生物抗体衍生物的特性可以将生物素化蛋白质衍生物分为两类：

生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），
标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。

生物抗体注意事项：

依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；
标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度0.5~5μg/ml; 生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab；
为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；
生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。