Elisa试剂盒注意事项与特点的方法
浏览次数:274 发布日期:2020-10-23
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Elisa试剂盒试验原理:
Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
Elisa试剂盒注意事项:
1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时,要用量程和需要Elisa试剂盒量接近的枪去吸,减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光敏感的,要在临用前现配。
13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清,否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
Elisa试剂盒组成结构:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品Elisa试剂盒不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
Elisa试剂盒特点:
一、高效、灵敏、特异的抗体。
二、稳定的重复性和可靠性。
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体。
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。
五、节省实验经费。