原代细胞复苏方法

                      原代细胞复苏方法
啊，秋雨把梧桐树的衣裳打黄啦，给秋天添上了一身神秘的彩装。秋天来了，天高云淡，蔚蓝的天空中，大雁成群结队地飞往南方，它们有时排着“一”字形，有时排着“人”字形。接下来介绍原代细胞复苏方法.
1、从液氮中取出原代细胞冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其间可以轻轻转动细胞，加快融化速度，大约需要1分钟时间。
2、5分钟内用培养基稀释至原体积的10倍以上，加入培养瓶中，再用1ml培养基洗涤细胞冻存管，保证细胞都被加入培养瓶中，静置于孵箱，12-16小时后更换培养基（除去DMSO）。以后每2天换一次液，保证细胞状态良好。

原代细胞传代方法：酶消化法
当细胞生长至70-80%左右可以传代，传代比例以1:2或1:3为佳。具体方法如下：
1、弃去培养瓶中培养基，用PBS洗涤培养瓶2遍，加入0.25%的胰酶消化液（Trypsin-EDTA，ScienCell品牌，货号0103），以消化液能覆盖整个瓶底为准。37度孵育4分钟左右，轻拍培养瓶侧面，显微镜下观察细胞消化情况，直到80%细胞呈现圆形。
2、细胞消化好后，加入胰酶中和液（TNS，ScienCell品牌，货号0113），并轻轻摇动培养瓶，形成细胞悬液，然后将细胞和培养基转移至离心管中，1000rpm离心5分钟。

3、弃去上清液，以1-2ml新鲜培养基重新悬浮细胞并吹打均匀，接种于包被好的新培养瓶中，瓶中已有10ml左右的培养基，放入培养箱中培养，每2天更换培养基。