脐静脉内皮细胞传代培养方法

Sciencell公司的人脐静脉内皮细胞（货号#8000、HUVEC）是科研实验中常用到的内皮细胞，当人脐静脉内皮细胞达到80-90%融合时，需要对人脐静脉内皮细胞进行传代培养。

传代培养方法：

1.准备培养瓶：用纤维粘连蛋白（货号#8248、BPF）以2ug/cm2包被培养瓶，包被时间为37度一小时或4度过夜。将培养基（货号#1001、ECM）、胰酶中和液（货号#0113、TNS）、胰酶/EDTA消化液（货号#0103、T/S）和无钙镁离子的磷酸盐缓冲液（货号#0303、DPBS），温度恢复至室温，我们不推荐用37°C水浴加热试剂和培养基。
2.胰酶消化：弃去原培养瓶中培养基，用10mlDPBS冲洗人脐静脉内皮细胞，然后加入2ml胰酶消化液。轻轻摇晃培养瓶以至胰酶消化液覆盖所有人脐静脉内皮细胞。如果使用ScienCell实验室的胰酶/EDTA消化液，会把胰酶消化对脐静脉内皮细胞的损害减少到最低。

3.终止消化：将培养瓶放入37度培养箱中1-2分钟，在孵化后期，轻轻拍打培养瓶以使脐静脉内皮细胞脱离瓶壁。显微镜下观察脐静脉内皮细胞形态变化，直至80%脐静脉内皮细胞变圆。然后立即加入10ml胰酶中和液并轻轻摇动培养瓶。

4.细胞收集：收集人脐静脉内皮细胞并将其转入50ml离心管中。再加入10ml培养基冲洗培养瓶以确保收集所有的残余脐静脉内皮细胞。在显微镜下观察培养瓶中剩余脐静脉内皮细胞的数量以确定是否将脐静脉内皮细胞大部分收集，剩余脐静脉内皮细胞数应小于5%。

5.离心重悬：以1000转/分（1000rpm)离心收取的脐静脉内皮细胞5分钟，弃去上清，在新加的培养基中重悬脐静脉内皮细胞。

6.铺板培养：对脐静脉内皮细胞计数，然后将它们接种到新的纤维粘连蛋白包被过的培养瓶中，37度培养即可。电话13683626447