感受态专题：真核细胞的转染实验步骤

1.  在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。

 

2.  待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液：

 

i.  溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5min

ii.  溶液B：将2-25?l LipofectAMINE 稀释到250?l无血清培养基中，静置5min

 

3.  混合溶液A和B，轻轻混匀，室温放置15-45min。

 

4.  用2ml无血清培养基轻轻洗涤细胞，加入0.8ml无血清培养基/孔，将脂质体复合物滴加到孔中，轻轻摇晃混匀，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。

 

5.  用完全培养基替换转染液，继续培养。

 

6.  24-72hr后检测蛋白质的表达或传代并加入选择性抗生素以筛选稳定表达株。