结直肠癌研究的老熟人 SW480,L15 和 DMEM 两种养法怎么选
浏览次数:16 发布日期:2026-10-12
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做结直肠癌方向的同学,SW480 基本是绕不开的一株。它和 SW620 来自同一个病人——SW480 取自原发灶,SW620 取自一年后的淋巴结转移灶,常被拿来配对研究转移过程。
SW480 是人结肠腺癌细胞,来自一位 50 岁 Dukes C 期白人男性患者的原位直肠腺癌。它 p53 有突变、高表达 p53 蛋白,c-myc、K-ras 等癌基因阳性,K-ras 第 12 位密码子的突变还能当 PCR 检测的阳性对照。可用于 3D 培养和癌症研究,也是合适的转染宿主。
细胞背景与来源
来源:人,原位直肠腺癌(Dukes C 期)。贴壁生长;用 DMEM 养偏圆、呈鹅卵石状,用 L15 养则扁平、圆形细胞少,这是两套培养体系的正常差异。
应用场景与研究价值
- 结直肠癌研究:肿瘤发生、侵袭、转移(常与 SW620 配对研究转移表型)。
- 分子检测:K-ras 第 12 密码子突变可作为 PCR 法检测该突变的阳性对照。
- 3D 培养与转染宿主:球体培养和基因转染。
培养特性与注意事项
培养基:L15 + 10% FBS + 1% 双抗(37℃、100% 空气、饱和湿度,不通 CO2);或 DMEM + 10% FBS + 1% 双抗(37℃、5% CO2)。两套体系生长速度差不多,按实验室条件选即可。
传代:PBS 润洗后胰酶 37℃ 消化,细胞明显回缩、间隙变大但未脱落时加完全培养基终止(别硬吹),1000 rpm 离心 3 min;推荐 1:2,长到 80% 就传。换液 2 天一次。
冻存:92% FBS + 8% DMSO(或 92% 完全培养基 + 8% DMSO),程序降温盒 -80℃ 过夜转液氮。复苏:37℃ 水浴 2 min 内,150g 离心 2 min,24 h 后看贴壁。生物安全:BSL-1,人源细胞建议按 BSL-2 防护操作。
注意:DMEM 体系贴壁慢,复苏或传代后要 48 h 才能完全铺展,建议 48 h 后再换液;背景里的黑点是代谢产物和碎片,不影响生长,多了用预热的 PBS 轻润洗;两套体系互换不用过渡,直接换就行。
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