层析实验中分子筛的正确保存及维护技巧

浏览次数：79　发布日期：2026-9-28　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

分子筛是层析实验中非常娇贵的存在。一方面，分子筛粒径小，分辨率高，可以去除难以分开的微量杂质；另一方面，想要获得高质量的结果，也离不开分子筛保持高性能的状态，一旦发生损坏，往往难以补救。接下来，小优就带你看看想要呵护这位娇贵宝宝，有哪些细节需要注意吧~

一、正确保存很重要
（1）分子筛在运输过程中是保存在20%的乙醇中的，以避免微生物的繁殖。在使用时，需要先用去离子水把乙醇冲洗掉，然后再用缓冲液对层析柱进行平衡。如果超过2天不使用层析柱，在纯化结束后，需要先用2柱体积缓冲液对层析柱进行再生，然后用2倍柱体积的去离子水冲洗柱子，再充入20%乙醇进行保存。
（2）分子筛顶端自带有储液装置（Shipping Device），里面装填有20%乙醇。储液装置通过内部的弹簧给予压力，如果层析柱中液体减少，可以为层析柱补充液体，防止分子筛干掉；在使用时，需要先将储液装置移除；如果层析柱不经常使用，要将储液装置重新安装在层析柱上。

二、设置报警压，防止柱子压塌
分子筛中的凝胶是比较脆弱的，如果受到很大的压力，填料可能就会被压坏，无法复原。因此，在连接层析柱到仪器上之前，一定要在仪器上设置pre-column pressure和delta-column pressure；设置报警压之后，如果系统检测到很大的压力，就会自动停止运行，从而保护系统的层析柱；
如果柱子超压，需要检查一下情况：
（1）柱子是否堵塞。分子筛长期使用不清洗，或者样品没有过滤，会造成层析柱堵塞；此时需要用0.5M-1M的NaOH对层析柱进行反向清洗；
（2）如果流速开的过快，会对层析柱产生较大的压力，建议参考说明书的推荐流速开始实验。另外，如果在低温条件下使用，或者缓冲液的粘性比较大时，容易产生较大的压力，此时应适当降低流速。运行缓冲液中含有甘油或者蔗糖等较为粘稠的成分或者低温运行时，应适当降低流速使用，以免超压。

三、尽量避免引入不可溶颗粒和气泡
（1）在上样前，样品需要经过0.22um或者0.45um的滤膜过滤，以去除一些不可溶的颗粒和杂质；对于小体积的样品，可以通过高速离心的方式去除沉淀或者不溶物；
（2）连接层析柱时，使用液液相接的方式进行连接；在连接层析柱之前，先给予系统一个低流速，拧开层析柱上端堵头，先将柱子顶端凹陷处填满，然后再将接头连接到柱子顶端；
（3）在实验开始前，需要准备足够的缓冲液。缓冲液在使用前需要先过滤，然后超声除气泡。如果缓冲液跑干需要及时补充，否则会引入大量的气泡；

四、经常清洗很重要
定期清洗层析柱能够延长使用寿命，并维持高分辨率。在常规使用5-8次后，可以使用0.5M NaOH进行常规清洗；
- 对于Superdex/Superose Increase系列，先用0.5M NaOH反冲1个柱体积，紧接着用1个柱体积的去离子水冲洗，然后用至少2个CV的缓冲液调整回中性；最高可耐受1M NaOH强力清洗；
- 对于Superdex/Superose Hiload系列，先用0.5M NaOH反冲1个柱体积，紧接着用1个柱体积的去离子水冲洗，然后用至少2个CV的缓冲液调整回中性；最高可耐受0.5M NaOH强力清洗；
- 对于Sephacryl系列，先用0.2M NaOH反冲1个柱体积，紧接着用1个柱体积的去离子水冲洗，然后用至少2个CV的缓冲液调整回中性；最高可耐受0.2M NaOH强力清洗；
- 对于Sephadex系列，先用0.2M NaOH反冲1个柱体积，紧接着用1个柱体积的去离子水冲洗，然后用至少2个CV的缓冲液调整回中性；最高可耐受0.5M NaOH强力清洗；

如果发现层析柱发生颜色改变，压力增高等情况，并且常规清洗没有效果时，可以使用强力清洗；

例如使用0.5M 醋酸溶液，1M NaOH，8M尿素或者6M 盐酸胍（针对蛋白沉淀），30%异丙醇（对于脂类或者疏水物质），再者还可以考虑使用胃蛋白酶（1mg/ml溶于0.1M醋酸、0.5MNaCl中）消化，再使用NaOH清洗。

五、如何检测层析柱性能？
采用柱效测定的方法可以检测层析柱的性能。柱效测定可以使用1%丙酮检测UV280，也可以使用0.8M NaCl检测电导值，上样体积均为1%柱体积。

在Unicorn软件中的[method editor]页面，可以使用柱效测定[column performance test]的程序模板。