H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法实验通用规则
浏览次数:480 发布日期:2022-10-8
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产品名称
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规格
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检测方法
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H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
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100管/48样
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微量法
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实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
2、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
3、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
4、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
5、实验时,要使底物避光保存。
6、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
8、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
10、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。