病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒操作步骤与常见问题

病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒​操作步骤：
转移20 µl 蛋白酶K至1.5ml离心管中。
转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl，用Buffer PBS或无核酶水补足。（咽/口腔拭子，或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。）
加入200µl 裂解液 至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置10min。
加入250µl无水乙醇 至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3min。
把 纯化柱 装在2ml收集管中，转移步骤4的混合液至纯化柱中。12,000rpm离心1min。
倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl 洗涤液 至纯化柱中,12,000rpm离心1min。
按照步骤6重复一次。
倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12,000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。
将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µl Nuclease Free Water至纯化柱的膜中央，室温静置1min，12,000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA。

常见问题：
纯化柱堵塞
样品用量太多：处理动物抗凝血液时，样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品，如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
蛋白酶 K活性下降：重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃，避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。
样品含固体颗粒：在第4步加入乙醇前，12,000rpm离心3min去除未消化的杂质，转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
样品裂解不充分：样品与裂解液混匀不充分。重新提取，加入裂解液后先颠倒混匀3-5次，然后以高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。

下游应用结果不理想
样品被反复解冻： 避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
蛋白酶K活性下降：更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃，避免反复冻融。
Nuclease Free Water被污染：更换新的Nuclease Free Water或DEPC处理水。
乙醇残留：柱子在洗脱前，需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用，柱子在洗脱后，打开柱子的盖子，放置10-15min让乙醇彻底挥发。
洗脱效率：处理富含DNA的样品时，把Nuclease Free Water预热至55℃后再进行洗脱，有利于提高DNA得率。