开心果源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素
浏览次数:348 发布日期:2021-1-13
来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
开心果源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
人白介素1(IL-1)ELISA检测试剂盒
人S100B蛋白(S-100B)ELISA检测试剂盒
人S100蛋白(S-100)ELISA检测试剂盒
人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA检测试剂盒
人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA检测试剂盒
人Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA检测试剂盒
人Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA检测试剂盒
人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA检测试剂盒
人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA检测试剂盒
人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA检测试剂盒
人6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA检测试剂盒
人磷脂酶A2(PL-A2)ELISA检测试剂盒
人纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA检测试剂盒
人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA检测试剂盒
人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA检测试剂盒
人细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA检测试剂盒
人神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测试剂盒
人前列腺素E2(PGE2)ELISA检测试剂盒
人皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA检测试剂盒
人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒
人内皮抑素(ES)ELISA检测试剂盒