免疫共沉淀反应

免疫共沉淀反应 
1．  转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30 min,细胞裂解液于4°C，最大转速离心30 min后取上清；
2． 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；
3． 取10 μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次，每次3 000 rpm离心3 min；
4.． 将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4 h，使抗体与protein A琼脂糖珠偶连；
5． 免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1 ml裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15 μl的2×SDS 上样缓冲液，沸水煮5分钟；
6． SDS-PAGE，Western blotting或质谱仪分析。