菌株分离培养特性研究结果分析

1.菌株分离培养特性和镜检
        剖检观察病死羔羊肺脏组织，肉眼可见肺脏大部分呈现肉变，并伴有白色化脓灶。分离菌株在绵羊血琼脂平板上生长为均一的灰白色、边缘光滑、湿润的圆形菌落，革兰氏染色呈现阴性短小杆菌。
2. 分离菌株生化特性
      经细菌生化鉴定仪鉴定，分离株与大肠杆菌的生化反应特点一致，包括不产生氧化酶、苯丙氨酸脱氨酶、DNA酶以及硫化氢；能产生赖氨酸脱羧酶；分解乳糖，但不利用柠檬酸盐、D-阿东醇和纤维二糖等，是大肠杆菌的可信度为99% (表 2)。在麦康凯平板上生长为红色、湿润圆形菌落；在伊红美兰平板上生长为黑色带有金属光泽圆形菌落；革兰氏染色镜检为阴性杆菌。
3. 分离株16S rRNA基因鉴定结果
    以细菌DNA为模板，PCR扩增大肠杆菌16S rRNA基因序列，经琼脂糖凝胶电泳检测分离株扩增出202 bp大小的目的条带(图 2)。将测序序列与GenBank数据库E. coli参考株16S rRNA基因序列进行同源性比对。结果显示，分离株16S rRNA基因序列与E. coli参考株CP020933.1、KY906967.1、LC259015.1等相似性均为99%以上。
4. 分离株致病性试验结果
         试验组小鼠感染后双目紧闭，被毛潮湿杂乱，呈腹式呼吸，濒死小鼠表现为全身颤抖，6 h内全部死亡(100%)，而对照组小鼠无死亡。剖检发现死亡小鼠肝脏肿大，边缘有出血点，脾脏肿大变黑，肺脏充血及出血，局部出现坏死。无菌采集小鼠肺脏、肝脏、脾脏，均分离到与注射菌一致的大肠杆菌。
5. 药物敏感性试验结果
    按CLSI标准判断分离菌株对青霉素、阿莫西林、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、阿奇霉素和克林霉素等14种抗生素耐药；对头孢唑啉、丁胺卡那和多粘菌素B中度耐药；对头孢他啶、头孢哌酮、氧氟沙星和米诺环素敏感。
6. ExPEC毒力因子扩增结果
    以细菌DNA为模板，对9种ExPEC毒力因子进行PCR检测，扩增到iutA (314 bp)、fyuA (787 bp)和ireA (254 bp) ，且扩增片段序列与GenBank参考序列的相似性大于99%。未检测到papA、sfaS、focG、hlyD、afa和vaT等基因。
7. 病理组织学观察结果
    病死羔羊肺脏支气管管腔充血，淋巴管扩张，周围淋巴细胞浸润、增生，肺脏肺泡壁毛细血管充血，肺泡腔内淋巴细胞浸润；人工感染小鼠肺脏肺泡腔内充满渗出物，出现肺泡性肺气肿，肺脏血管管腔充血，淋巴细胞增生，肺泡周围炎性细胞浸润。