标记的链霉卵白素-生物素法(LSAB)

                 标记的链霉卵白素-生物素法(LSAB)          

标记的链霉卵白素-生物素法(LSAB法)是标记的卵白素技术，20世纪80年代开始采用。

基本试剂：
① 第一抗体；
② 生物素化第二抗体；
③ 辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素。

实验方法：
1. 将固定后的标本用PBS漂洗；
2. 于室温下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用来密封内源性过氧化物酶；
3. TBS漂洗3次，每次1min；
4. 在室温下用二抗的正常血清孵育20min；
5. 滴加一抗后在室温下放置1h或4℃冰箱内过夜；
6. TBS漂洗3次，每次1min；
7. 滴加二抗后于室温放置30min；
8. 将标本于生物素化的第二抗体在室温孵育10min；
9. TBS冲洗3次，每次1min；
10. 再与稀释的LSAB在室温孵育10min；
11. 重复步骤9；
12. 用DAB或AEC显色；
13. 用蒸馏水反复冲洗；
14. 用苏木精复染；
15. 封片；