哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（分光光度测定）

                      哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（分光光度测定）

试剂和器材： 
1.反应缓冲液：5g/L聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）、0.05mol/L柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液，pH4.3；
2.终止液：0.25%甘氨酸-NaOH，pH10；
3.底物：6mmol/L对硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于缓冲溶液中；
4.微量离心机，带1.5—2.0ml小管；
5.分光光度计（可见波长）带1ml比色皿；

紫外-可见分光光度法测定酶活
酶活测定：以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。
酶活定义：以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lμmol／L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。

实验方法：
1.每次检测，将0.5ml底物与沉淀于微量离心小管中的膜组分或50μl膜的混悬液混合；
2.如第1步设置空杯样，立即加入终止（缓冲液）1ml；
3.37℃孵育检测液30min；
4.加入1ml的终止（缓冲液）到检测液中；
5.在微量离心机中离心1—2min，去除任何沉淀物质；
6.读出在410nm波长下检测液相对于空白样的吸光值；