原代细胞核仁的制备

                                   原代细胞核仁的制备

试剂和器材： 
1. 悬浮缓冲液：0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl^₂、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；
2. 密度阻滞溶液：0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl^₂、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制剂；
4. 吊桶式低温低速或高速离心机；
5. 超声发生器；
6. 光学显微镜（相差或普通光学显微镜）；

实验方法：
   所有操作须在0—4℃完成。
1. 将纯化的原代细胞细胞核溶于悬浮缓冲液中；
2. 超声处理悬液10—15s，中间间隔30—40s；
3. 用1g/L美蓝染色，通过相差或普通光学显微镜监测核的破裂。通常原代细胞细胞核完全破裂需要40—60s的超声处理；
4. 在离心管中，将超声处理物加入到一半体积的密度阻滞溶液上，2000g离心20min并收集核仁沉淀；