用碘克沙醇梯度溶液从哺乳动物肝脏中分离细胞核

试剂和器材： 
1. OptiPrepTM（600g碘克沙醇，ρ=1.32g/ml）；
2. OptiPrepTM稀释剂（OptiPrepTM diluent，OD）：150mmol/L KCl、30mmol/L MgCl2、120mmol/L三甲基甘氨酸-KOH，pH7.8；
3. 匀浆介质（HM）：0.25mol/L蔗糖、25mmol/L KCl、5mmol/L MgCl2、20mmol/L三甲基甘氨酸-KOH，pH7.8；按要求向OptiPrepTM稀释剂和匀浆介质中加入蛋白酶抑制剂
4. 高转矩桥式电动机（半导体开关控制）；
5. Potter-Elvehjem匀浆器，20—40ml，孔隙约0.07mm；
6. 高速离心机，带可容纳15—50ml离心管的吊桶式转子；
7. 注射器，带金属套管针（内径约0.8mm）；
8. 尼龙滤网；

实验方法：
   所有操作在0—4℃下进行。
1. 制备500g/L碘克沙醇工作液：每5倍体积OptiPrepTM用1倍体积的OptiPrepTM稀释剂来稀释；
2. 梯度溶液：用匀浆介质（分别为6倍体积+4倍体积和7倍体积+3倍体积）来稀释500g/L碘克沙醇工作液以制备300g/L和350g/L的两种碘克沙醇梯度溶液。保持于冰上。
3. 切除肝脏并用剪刀剪切成微小碎块；
4. 将大约一半肝脏转移到Potter-Elvehjem匀浆器的20ml匀浆介质中，并用研杵研磨约8次，在约500r/min转速下旋转以破碎组织；
5. 对另一半肝脏切碎物重复以上操作；
6. 用尼龙滤网过滤；
7. 通过与等体积的500g/L碘克沙醇工作液混合将匀浆液调整到250g/L碘克沙醇；
8. 将10—15ml匀浆液转移到50ml管中，从300g/L和350g/L的碘克沙醇梯度溶液中各取10ml加到匀浆液之下；
9. 在100000g下离心20min；
10. 细胞核在300g/L和350g/L碘克沙醇界面上成带，用注射器和金属套管针吸取细胞核；
11. 用2倍体积的匀浆介质稀释悬液，在2000g下离心10min沉淀细胞核；