等密度离心法去除红细胞和死细胞

等密度离心法去除红细胞和死细胞                                                         

器材和试剂： 
所有直接接触细胞的用品和试剂必须无菌。
1. 标注体积刻度的试管（圆锥形底）；
2. 巴斯德吸管（短型和长型）；
3. 10ml刻度吸管和洗耳球或移液装置；
4. 台式离心机；
5. 淋巴细胞分离液或类似试剂；
6. 培养基；

实验方法：
1. 重悬细胞使之达到5×10⁶—10⁷个/ml的高浓度。在一个离心管中加入10ml淋巴细胞分离液，用巴斯德吸管或10ml移液管小心将5ml的原代细胞悬液加于淋巴细胞分离液面上。将容器倾斜一个角度，沿容器壁慢慢地将细胞悬液滴下，而不是直接滴到淋巴细胞分离液表面。目的是在两种液体之间得到一个清晰的界面，以便更好地分离；
2. 不制动1000r/min离心试管20min（注：离心时缓慢地减速可使淋巴细胞分离液与培养基之间形成清晰的界面）；
3. 从离心机中小心地取出容器，观察两液面之间的界面，可见一乳状黄色细胞带。红细胞和死细胞形成沉淀沉于容器底部；
4. 用一个巴斯德吸管吸出界面可见的细胞层，转入一个离心管；
5. 向收集的细胞中加入新鲜培养基并混匀。1000r/min离心5min，重复两次，洗去细胞表面的淋巴细胞分离液；
6. 将细胞重悬于已知体积的培养基中，进行细胞计数和活力测定；