饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞

饲养层细胞共培养体外扩增原代CD34+细胞

试剂和材料：
1. MSCs培养基；
2. 6孔培养板；
3. 丝裂霉素C，100μg/ml；
4. 共培养的培养基：IMDM添加10%FBS，100U/ml青霉素和100μl/ml链霉素；
5. 细胞因子（干细胞因子，IL-6，Flt-3配体，促血小板生成素）；

实验方法：
1. 将脐带血来源的间充质干细胞（CB-MSCs）作为饲养层细胞，用MSCs培养基重悬CB-MSCs，细胞浓度为5×104个细胞/ml；
2. 将CB-MNCs接种到6孔板；
3. 每周两次半量更换新鲜培养基；
4. 当CB-MNCs达到90%以上汇合时，用10μg/ml丝裂霉素C处理，37℃ 2.5h；
5. 用无血清IMDM将CB-MNCs洗两遍；
6. 按1×104/ml CD34+细胞重悬于含细胞因子的共同培养基（100ng/ml干细胞因子，100ng/ml IL-6，50ng/ml Flt-3配体，10ng/ml促血小板生成素）；
7. 将CD34+细胞接种到CB-MSCs饲养层细胞上；
8. 每周两次更换1/4培养基；
9. 2周后，收集未贴壁细胞；