体外三维基质中原代CD34+细胞的扩增

体外三维基质中原代CD34+细胞的扩增

                     
试剂和材料：
1. 培养基：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM，添加1%牛血清白蛋白，10μg/ml胰岛素，0.1mmol/L 2-巯基乙醇，50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素；
2. 48孔培养板；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. 纤维粘连蛋白（fibronectin）包被的细胞基质支架；
5. 细胞因子（干细胞因子，IL-6，IL-3，Flt-3配体）；

实验方法：
1. 用含细胞因子的培养基重悬细胞（100ng/ml干细胞因子，20ng/ml IL-6，20ng/ml IL-3和100ng/ml Flt-3配体）；
2. 将2.5×105 CD34+细胞/ml接种到纤维粘连蛋白包被的48孔培养板；
3. 每周两次半量更换新鲜培养基；
4. 两周后收集细胞；
 （1）250g离心10min，从三维细胞基质支架中收集非贴壁的细胞；
 （2）贴壁的细胞用0.05%胰蛋白酶/EDTA孵育细胞基质，37℃孵育30min，随后250g离心10min；