酶消化法从Wharton胶中分离干细胞

酶消化法从Wharton胶中分离干细胞

试剂和材料：
1. 培养基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%热灭活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
2. PBSA；
3. 胰蛋白酶，2.5%；
4. 胶原酶A，0.1%用PBSA配制；
5. 培养瓶；
6. 圆锥形离心管，50ml；
7. 剪刀；
8. 镊子；

实验方法：
1. 脐带取材后，可在PBSA中保存1-24h；
2. 除去血管，将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块；
3. 将剪碎的组织块转移到50ml离心管，用无血清DMEM洗，室温250g离心5min；
4. 倒掉上清液，将离心后的沉淀物拍散，浸泡在0.1%胶原酶（大约是沉淀物体积的3倍）中，37℃消化16-18h；
5. 加入适当体积的PBSA（消化液体积的2倍），室温250g离心5min；
6. 倒掉上清液，加2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍）37℃处理30min，轻轻搅动；
7. 加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止胰蛋白酶作用；
8. 用培养基洗；
9. 用培养基重悬分离得到的细胞，按大约1×103个细胞/cm2密度将细胞接种到培养瓶中；