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基因敲除载体构建
艾迪基因基于自身研发的EditX™基因编辑平台,采用优化升级的CRISPR/Cas9系统,可综合研究目的、基因与细胞等情况,制定合适的敲除策略,构建符合需求的敲除载体。
服务类别:分子与细胞总访问:200
最后更新:2025-8-5半年访问:55
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基因敲除载体构建
艾迪基因基于自身研发的EditX™基因编辑平台,采用优化升级的CRISPR/Cas9系统,可综合研究目的、基因与细胞等情况,制定合适的敲除策略,构建符合需求的敲除载体。
▍ 详情描述
目前常用CRISPR-Cas9系统来实现基因敲除,CRISPR-Cas9系统具由sgRNA和Cas9两部分组成。Cas9蛋白是一种由gRNA引导的DNA切割酶,具有特异切割双链DNA的活性。在gRNA的引导下,Cas9蛋白能够识别并结合到目标DNA序列上。一旦Cas9蛋白与目标DNA序列结合,其切割活性就被启动,导致DNA双链断裂(DSB),成为细胞修复机制的一个信号。细胞对于DNA双链断裂有两种主要的修复方式:非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HDR)。
*非同源末端连接(NHEJ):在没有模板DNA的情况下,细胞通过NHEJ修复机制将断裂的DNA两端连接起来。但这一过程容易引入小的插入或缺失(Indels),导致基因失活。这种修复方式常被用于基因敲除。 
*同源重组(HDR):当提供一段模板DNA时,细胞可以通过HDR修复机制在修复过程中精确插入新的DNA序列。这种修复方式被用于引入特定的突变或基因片段。


▍ 现货产品
 
 
 ▍ FAQ
1、如何选择合适的载体类型?
选择载体时,应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如,质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增,病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外,载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
 
2、艾迪基因载体构建的宿主菌是什么?顾客可以使用什么类型菌株来扩增质粒载体?
载体在进行扩增时,通常会使用大肠杆菌(E. coli)菌株来进行。在实验操作中,常用的大肠杆菌菌株是DH5α。DH5α适用于大多数非重组型载体。对于重组型载体,如慢病毒载体和转座子载体等,可以使用Stbl3菌株进行扩增。Stbl3是一种特殊的大肠杆菌(E. coli)菌株,来源于,HB101 E. coli strain,其基因组含有重组酶recA13突变,这可以有效地抑制长片段末端重复区的重组,从而降低错误重组的概率。

该产品被引用文献
▍ 参考文献
1. MIA PaCa-2和PANC-1细胞中敲除FUT8基因
α1,6-Fucosyltransferase contributes to cell migration and proliferation as well as to cancer stemness features in pancreatic carcinoma
胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adencarcinoma, PDAC)是一种极其恶性的肿瘤,占所有胰腺癌的90%。研究表明,癌细胞表面的异常糖基化变化与肿瘤进展和转移正相关,α1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)是负责催化核心岩藻糖基化的关键酶,其在多种恶性肿瘤中的表达和激活异常,与多种生理和病理过程相关,尽管FUT8在其他类型的癌症中的作用已被观察到,但其在PDAC恶性转化中的具体分子机制和作为潜在治疗靶点的可能性尚不清楚。
研究人员使用CRISPR/Cas9系统在MIA PaCa-2和PANC-1细胞中敲除FUT8基因,通过Transwell迁移实验和创伤愈合实验评估FUT8-KO细胞的迁移能力,通过MTT实验和集落形成实验评估FUT8-KO细胞的增殖能力,并检测了FUT8-KO细胞中癌症干细胞标志物的表达水平。结果显示,与野生型细胞相比,FUT8-KO细胞的迁移能力、增殖和集落形成能力显著降低,FUT8-KO细胞中癌症干细胞标志物的表达降低。FUT8基因敲除细胞揭示了FUT8在胰腺癌中的重要作用,证明了FUT8可能是胰腺癌治疗的一个潜在靶点,为未来的胰腺癌治疗策略提供了新的视角。
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