RNA测序

技术路线

1.提取总RNA

2.分离mRNA
mRNA片段化

反转录合成双链cDNA
双链DNA末端修复及3'末端加‘A' 
使用特定的测序接头连接DNA片段两端
Fusion聚合酶扩增构建成PCR文库

3.成簇（Cluster）扩增

4.高通量测序（Hiseq2000）

5.生物信息学分析

 信息分析内容

1．InsertSize长度检验

2．比对信息统计

３．随机性实验检验图

４．基因覆盖度、深度统计
这项分析主要给出每个基因被Reads 覆盖的百分比(Coverage)、碱基的平均测序深度(sequencing depth)、比对到该基因上的总Reads 数目、Uniquely 比对到该基因上的Reads 总数以及基因的描述等信息

５．基因差异表达分析
比较不同样品间表达差异的基因，给出在每个样品中上调/下调基因及GO分类图形 

送样要求

样品浓度：总RNA样品浓度不低于400 ng/ul，总量不低于20ug，并进行去蛋白及DNase处理。

样品纯度：总RNA样品OD值在1.8-2.2之间，制备样品时请不要使用LiCl沉淀。建议在条件允许情况下，提供可供两次样品制备的量，以保证测序的按时进行。

需提供每个样品具体的浓度、体积、溶剂成分、制备时间以及物种来源，同时附上QC数据，可包括电泳胶图、分光光度或者Nanodrop仪器检测数据、Agilent Bioanalyzer仪器检测数据等（我们要求至少要有其中一种的检测结果），确保总RNA 28S：18S至少大于1.8。

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