HDAC3选择性抑制剂RGFP966的抗炎与肾脏保护研究

HDAC3属于I类HDAC，通常作为NCoR/SMRT核心抑制子复合物的催化亚基，去除组蛋白尾部赖氨酸的乙酰基，从而压缩染色质并抑制转录；其去乙酰化活性依赖与NCoR/SMRT去乙酰化激活域的相互作用[2]。在HDAC3活跃的基因座，H3/H4等位点的乙酰化被限制，转录机器的进入与组装受到抑制。RGFP966通过抑制HDAC3的催化活性，阻断去乙酰化，促使染色质处于高乙酰化、更开放的状态。由此，局部调控平衡向CBP/p300等乙酰转移酶倾斜，促进共激活子招募并解除HDAC3介导的转录抑制。

鉴于RGFP966在所述浓度窗内不显著影响其他HDAC，它使研究者能够将观测到的转录与染色质变化明确归因于HDAC3，而非HDAC1/2/8等同源酶。这一点对于区分NCoR/SMRT–HDAC3复合物与其他I类HDAC复合物的贡献尤为关键。实验上，RGFP966可用于在短时间内提升HDAC3占据位点的组蛋白乙酰化，便于进行增强子预备、启动子清障和核小体重塑的时间分辨研究。常用表型读数包括组蛋白乙酰化的免疫印迹、H3K9ac/H4K12ac等位点的ChIP-seq、ATAC-seq评估染色质可及性、RNA-seq解析转录效应，以及乙酰组学捕捉HDAC3调控的非组蛋白底物[2]。

在神经活动依赖的转录与突触可塑性研究中，RGFP966已用于阐明选择性HDAC3抑制如何通过提高组蛋白乙酰化促进与记忆相关的基因表达程序[1]。在此之外，HDAC3还是连接核受体信号、代谢基因调控与昼夜节律转录的关键节点[2]；RGFP966提供了一种可逆、可剂量调控的手段，在不干扰其他HDAC家族成员的前提下检验这些网络中的因果关系。由此，RGFP966适用于与NCoR/SMRT等遗传扰动的化学–遗传联用、绘制HDAC3依赖的调控元件版图，并在多种细胞背景下确立HDAC3在特定转录回路中的控制作用。

■ 2. 文献分享

■ 2.1 HDAC 3-selective inhibitor RGFP966 demonstrates anti-inflammatory properties in RAW 264.7 macrophages and mouse precision-cut lung slices by attenuating NF-κB p65 transcriptional activity

▲ 通过免疫荧光显微镜观察NF-κB p65核转位、细胞核质分离后免疫印迹检测及核/浆组分蛋白定量、以及IκBα表达水平检测，证实RGFP966不影响LPS/IFNγ刺激的RAW 264.7巨噬细胞中NF-κB p65的核转位，表明RGFP966的抗炎作用不依赖于NF-κB通路的阻断。

RGFP966 (T1762) 在纳摩尔浓度下选择性抑制HDAC 3。在LPS/IFNγ刺激的RAW 264.7巨噬细胞中，RGFP966显著下调促炎基因IL-1β、IL-6与IL-12b的表达；同时，RGFP966抑制了NF-κB的转录活性，体现出对炎性信号通路的抑制作用。在离体小鼠肺组织切片模型中，RGFP966提高了抗炎基因IL-10以及M2标志基因Fizz1的表达，显示出对肺组织环境中巨噬细胞的抗炎效应。此外，RGFP966使RAW 264.7细胞中的HDAC1与HDAC2蛋白水平均出现轻度但显著的下降。上述结果表明，RGFP966在实现对HDAC 3的选择性抑制的同时，抑制NF-κB驱动的炎性转录，并在细胞与离体肺组织模型中协同调控炎症相关基因表达，呈现出明确的抗炎方向性效应。[3]

■ 2.2 Inhibition of Histone Deacetylase 3 Causes Replication Stress in Cutaneous T Cell Lymphoma

▲ 通过Western blot检测RGFP966处理24小时后H3K56ac水平，证实RGFP966可浓度依赖性增加CTCL细胞系中H3K56ac的乙酰化水平。

RGFP966 (T1762) 被描述为首个同类且具有选择性的HDAC3抑制剂，并基于条带荧光强度的定量测量显示对HDAC3具有至少8–10倍的选择性。在皮肤T细胞淋巴瘤模型中，RGFP966可降低CTCL细胞系的细胞生长，该生长抑制归因于其诱导的细胞凋亡，并伴随DNA损伤以及S期进程受损的特征。与HDAC3抑制作用一致，在HH与Hut78两种CTCL细胞系中，经RGFP966处理24小时后，H3K9/K14、H3K27与H4K5等位点的组蛋白乙酰化水平升高，西方印迹检测予以证实。剂量滴定研究还显示，在5–10 mM范围内，RGFP966对H3K56ac产生了相对温和的影响，其幅度约比Depsipeptide低15倍。上述结果共同表明，RGFP966可选择性作用于HDAC3，调控CTCL细胞中特定的组蛋白乙酰化标记，并通过诱导与DNA损伤及S期异常相关的细胞凋亡，从而降低CTCL细胞的生长。[4]

■ 2.3 The Effects of Pharmacological Inhibition of Histone Deacetylase 3 (HDAC3) in Huntington’s Disease Mice

▲ 通过监测体质量变化、转棒实验评估运动协调能力、旷场实验检测自主活动（水平运动距离和垂直站立次数），证实RGFP966（25 mg/kg）可显著改善N171-82Q亨廷顿病转基因小鼠的运动功能。

RGFP966 (T1762) 被描述为选择性作用于HDAC3的苯甲酰胺类HDAC抑制剂。其在中枢的分布较为高效，报告的脑/血浆浓度比分别为0.43。在N171-82Q转基因小鼠模型中，RGFP966以10与25 mg/kg给药可改善转杆与开放场探索中的运动缺陷，且处理显著提高了体重、转杆表现以及多项开放场运动学指标。结构层面的神经保护亦得到支持：持续给药显著阻止纹状体体积下降，RGFP966组相对野生型仅表现出5.9%的减少。在纹状体免疫相关转录谱中，检测到三项显著改变：Ccl17上调2.32倍，Mif下调2.4倍，Il13下调3.2倍。进一步验证显示，RGFP966在纹状体内显著降低Mif表达，同时纹状体内Il1b表达亦降低。与这些转录变化一致，RGFP966处理脑组织的纹状体中GFAP阳性细胞数量更少，提示星形胶质细胞活化水平下降。[5]

■ 2.4 HDAC3 inhibition mitigates acute kidney injury by alleviating RIPK1-mediated programmed necrosis

▲ 通过Western blot检测KIM-1和p-p65蛋白表达、qPCR检测炎症因子mRNA水平及免疫荧光分析KIM-1表达，证实RGFP966可显著减轻缺氧/复氧诱导的HK2细胞损伤及炎症反应。

RGFP966 (T1762) 被描述为选择性作用于HDAC3，并在体内与体外模型中表现出减轻急性肾损伤的显著保护作用。于缺血再灌注条件下，RGFP966 预处理通过阻止血尿素氮和肌酐升高而发挥保护作用；其还逆转p65激活与KIM-1蛋白及mRNA上调，并更显著抑制TNF-α、MCP-1与IL-1β的转录激活；组织学评估显示RGFP966 挽救肾小管扩张与坏死，且免疫荧光证实KIM-1与TNF-α蛋白下降。在顺铂模型中，RGFP966 预处理剂量依赖性降低血尿素氮与肌酐，减轻肾小管扩张与管型形成，抑制p65激活与KIM-1蛋白及mRNA升高，并显著抑制MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β的转录激活，同时降低肾组织中TNF-α与KIM-1染色信号。在体外，RGFP966 可缓解顺铂诱导的人肾小管上皮细胞编程性坏死。转录组结果显示，RGFP966 通过阻断炎症与编程性坏死而有利于缓解急性肾损伤；其被证明有效调节RIPK1介导的编程性坏死，从而改善顺铂诱导的急性肾损伤；并且RIPK1敲低实验表明，RGFP966 通过调控RIPK1介导的编程性坏死而减轻急性肾损伤。综上，RGFP966 在多种体内模型中对肾功能具有保护作用，并在体外减少坏死性细胞死亡与炎症。[6]

■ 3. 结语

RGFP966是一种高效且高度选择性的组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）抑制剂，通过阻断其催化活性，促进组蛋白乙酰化水平升高，使染色质处于更开放状态，从而解除HDAC3介导的转录抑制。文献表明，RGFP966在巨噬细胞及肺组织中抑制NF-κB驱动的炎性转录，展现抗炎活性；在皮肤T细胞淋巴瘤细胞中诱导DNA损伤相关的细胞凋亡，降低细胞增殖；在神经退行性模型中提供神经保护；并在多种急性肾损伤模型中通过调控炎症和RIPK1介导的程序性坏死发挥显著肾脏保护作用。未来研究可聚焦于RGFP966在炎症、神经疾病、肿瘤及肾病中的治疗应用，以及利用其选择性优势深入解析HDAC3依赖的转录调控机制。

■ 4. Q&A

Q1: RGFP966的作用机制是什么？

A1: RGFP966选择性抑制HDAC3的催化活性，阻止组蛋白去乙酰化，促进组蛋白乙酰化水平升高，使染色质更加开放，从而解除HDAC3占据位点的转录抑制。

Q2: 文献中提到RGFP966具有什么抗炎作用？

A2: RGFP966抑制NF-κB p65的转录活性，显著降低刺激的巨噬细胞中促炎基因（IL-1β、IL-6、IL-12b）的表达，并在离体小鼠肺组织中提升抗炎因子IL-10和M2标志Fizz1的表达，表现出明确的抗炎效果。

Q3: RGFP966在急性肾损伤模型中有何作用？

A3: RGFP966通过降低血尿素氮和肌酐水平，抑制p65激活和炎症细胞因子转录，减轻肾小管扩张与坏死，并调控RIPK1介导的程序性坏死，从而显著缓解多种体内外急性肾损伤模型。

■ 5. 参考文献

[1] McQuown SC, Barrett RM, et al. HDAC3 is a critical negative regulator of long-term memory formation. J Neurosci. 2011;31(2):764-774.

[2] Sun Z, Feng D, et al. Deacetylase activity is required for HDAC3 function in mice. Nature. 2013;504(7478):218-222.

[3] Leus N, van der Wouden P, van den Bosch T, Hooghiemstra W, Ourailidou M, Kistemaker L, et al.. HDAC 3-selective inhibitor RGFP966 demonstrates anti-inflammatory properties in RAW 264.7 macrophages and mouse precision-cut lung slices by attenuating NF-κB p65 transcriptional activity. Biochemical Pharmacology. 2016;108():58-74.

[4] Wells C, Bhaskara S, Stengel K, Zhao Y, Sirbu B, Chagot B, et al.. Inhibition of Histone Deacetylase 3 Causes Replication Stress in Cutaneous T Cell Lymphoma. PLoS ONE. 2013;8(7):e68915.

[5] Jia H, Wang Y, Morris CD, et al. The Effects of Pharmacological Inhibition of Histone Deacetylase 3 (HDAC3) in Huntington's Disease Mice. PLoS One. 2016;11(3):e0152498.

[6] Xie M, Hou R, Shan R, Cheng X, Wu P, Luo X, et al.. HDAC3 inhibition mitigates acute kidney injury by alleviating RIPK1-mediated programmed necrosis. Frontiers in Pharmacology. 2025;16():.