软骨细胞条件性基因敲除工具：Col2a1-2A-CreERT2诱导型Cre小鼠的介绍
软骨是研究中最难"精准操作"的组织之一：它没有血管和神经，细胞外基质致密，常规药物干预与全身性基因操作都难以把效应集中在软骨细胞。与此同时，软骨细胞在关节稳态、生长板发育与骨折修复中的作用又十分重要：它组成关节软骨与生长板，承担胚胎期软骨支架的形成，也参与成年后的骨折愈合，其功能异常与骨关节炎、软骨发育不良等疾病密切相关。对于骨关节炎、软骨损伤与软骨发育不良研究者来说，缺乏时间可控的软骨特异性基因操作工具，往往是深入解析分子机制的关键障碍。要回答这些生物学问题，就需要一个能在软骨细胞中按需启动的Cre工具。II型胶原是透明软骨的标志性结构蛋白，其编码基因Col2a1在软骨细胞中特异性表达，为这类工具提供了理想的驱动序列。
该品系在Col2a1基因终止密码子前定点敲入2A-CreERT2表达框，使诱导型CreERT2跟随内源Col2a1的表达谱工作。CreERT2的活性由他莫昔芬（Tamoxifen）控制：未诱导时处于无活性状态，诱导后其代谢产物与ERT结构域结合，重组酶进入细胞核发挥重组酶活性。与携带loxP位点侧翼目的基因的小鼠交配后，经诱导即可在软骨细胞中敲除floxed基因序列。需要特别提醒的是，该品系繁育无法获得纯合子，研究使用杂合子即可。
验证实验将Col2a1-CreERT2与Rosa26-LSL-tdTomato交配后取胚胎进行荧光检测：经他莫昔芬诱导后，可在发育中的骨骼系统观察到tdTomato表达（E12.5组：E11.5诱导一天、E12.5检测；E15.5组：E12.5诱导三天、E15.5检测；诱导剂量150mg/kg体重），表明Cre活性可在胚胎期骨骼系统中发挥。
从软骨发育到疾病进程，该品系可以用于三类研究：追踪软骨细胞在胚胎软骨支架与生长板中的命运，或在其中条件性敲除目的基因，研究软骨发育的调控机制；在骨关节炎模型中诱导性敲除软骨代谢、肥大与退变相关基因，考察其对关节软骨破坏进程的影响；以及在骨折愈合与软骨修复研究中解析软骨细胞的功能贡献，为治疗策略的开发提供模型基础。
该品系由南模生物研发，目录号NM-KI-18029。品系信息与验证图像可在南模生物官网查询，如需讨论软骨特异性敲除的方案设计，欢迎联系南模技术团队。
Col2a1-2A-CreERT2 与 Col2a1-Cre 有什么区别，该怎么选？
组成型Col2a1-Cre 从软骨形成早期即开始重组，无法区分基因在发育期与成体软骨中的不同功能，且可能导致模型携带先天性发育缺陷。Col2a1-2A-CreERT2 属于诱导型工具：他莫昔芬诱导后 CreERT2 才入核启动重组，研究者可自主选定骨关节炎造模后、骨折后或特定发育节点作为操作窗口，将基因功能精确锁定在目标阶段，适用于需要区分软骨发育与成体稳态功能的实验设计。
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