应用TSQ 8000 Evo三重四极杆串接气质快速筛查烟草中122种农药残留
关键词
TSQ 8000 Evo；烟草基质；农药残留；快速筛查；方法包
1. 前言
2014 年 1 月 15 日中国烟草总公司颁布了烟草及烟草制品中 多种农药残留量的测定的行业标准 YQ/T 47.1—2014，其中第 一部分为串接气质检测农药残留的方法。该标准于 2014 年 2 月 10 正式实施。赛默飞世尔科技针对这一行业标准，开发了
烟草中检测多农残的方法。
本实验用 TSQ 8000 Evo 结合赛默飞世尔科技农残分析色谱柱 （TR-pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 µm）分析烟草中的122种农药残留，得到了非常出色的结果。各种农药的最低检测 限在 0.004ppb-0.75ppb 之间，在 5 ppb–200 ppb 的范围有 良好的线性，且用 10 ppb 样品连续 5 针进样，得到 RSD 在 1.01%–9.69% 之间，表明此方法具有良好的重现性。
2. 实验部分
2.1 仪器和色谱柱
TSQ 8000 Evo 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（Thermo ScientificTM 美国），TR-pesticide II 农残分析柱（30 m*0.25 mm*0.25 µm 带 5m 预柱）
2.2 仪器方法
GC 方法：
传输线温度：300ºC。
PTV 进样口：起始温度为70ºC，进样时间 0.05 min；然后 以 4.5ºC/min 升至 280ºC，保持 1 min，将所有化合物通过 程序升温的进样方式转移至色谱柱；随后以 14.5ºC/min 升至 320ºC，保持 5 min，设置进样口的清洁模式。不分流进样，不分流时间1.5min。
载气：恒流，1.2 mL/min；
柱温箱：40ºC 起始保持 1.5 min，以 25ºC/min 升至 90°， 保持 1.5 min；再以 25ºC/min 的速率升至 180ºC；随后以5ºC/min 的速率升至 280ºC；最后以 10ºC/min 的速率升至 300ºC，保持 5 min。整个升温程序 35 min。
进样量：2 µl
质谱方法：
离子源温度：300 ºC，灯丝电流为 25 µA，采用 T-SRM 方法， 无需分时间段。部分方法如图 1 所示（总共 402 对 SRM 离子对）：
2.3 前处理方法
提取
称取 2 g 样品于 50 mL 具盖离心管中，精确至 0.01 g，加 入 10 mL 水（4.1），手持离心管振荡直至样品与水充分混合 后，静置 10 min。分别移取 10 mL 乙腈（4.2）和 0.1 mL 混 合内标工作溶液（4.11.4）于该离心管中，并置于漩涡混合 振荡仪（5.2）上以 2000 r/min 速率振荡 2 min。将离心管在 （-18℃ ~-20℃）条件下冷冻保存 10 min 后，取出。向离心 管中分别加入 5 mL 甲苯（4.3）、4 g 无水硫酸镁（4.4）、1 g 氯化钠（4.5）、1 g 柠檬酸钠（4.6）、0.5 g 柠檬酸氢二钠（4.7），立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪 （5.2）上以 2000 r/min 速度振荡 2 min，然后以 4000 r/min 离心 5 min。收集上层清液备用。
净化
移取 1.5 mL 样品提取液上层清液（7.1）于 2 mL 离心管中， 加入 150 mg 无水硫酸镁（4.4）和 50 mg N- 丙基乙二胺键合 固相吸附剂（4.8），于漩涡混合振荡仪（5.2）上以 2000 r/ min 速率振荡 2 min，以 4000 r/min 离心 5 min，收集上层清液，待检测分析。
3. 实验结果
3.1 Auto SRM 优化部分化合物的离子对信息
AutoSRM 顾名思义就是可以自动优化化合物SRM 离子对的软件，该软件通过选择母离子，选择子离子，自动优化碰撞能量这三个步骤可以完成方法优化，极大得简化了常规串接气质
建立化合物检测方法的步骤，节省了时间。赛默飞世尔科技全 新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪 TSQ 8000 Evo 独有的 AutoSRM 功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当一次优化的化合物数目较多时，可以智能得调整进样的次数以期在最少的时间内得到最优化的方法，使得整个方法建立部分 更加简单方便。整个 AutoSRM 的步骤如图 1 所示：1）选择母离子
2）选择子离子
3）优化碰撞能量
3.2 标准曲线
分别配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混标溶液，采用内标法定量，内标为莠去津或者三苯基磷酸酯（按 照保留时间来确定以哪种物质为内标，本实验保留时间在 20 min 之前的化合物都以莠去津为内标，20 min 之后以三苯基磷酸酯为 内标）。下表列出所有 122 种化合物的标准曲线方程以及线性相关系数，可以看出，应用 TSQ 8000 Evo 快速扫描检测这 122 种化合物，可以得到良好的线性方式，有利于定量的准确性。
表 1： 122 种化合物的线性方程及相关系数（* 表示 IS）
3.3 重现性及最低检出限
用10ppb的样品重复进样5针，检测方法的重现性。所得的重现性结果如下图所示，所有的化合物的重现性在1.01%-9.69%之间（如 表 2 所示）。分别配置100ppt、200ppt、500ppt、1ppb以及2ppb的样品，按照S/N为3和S/N为10来估算化合物的最低检出限及最低定量限。 各个化合物的 LOD 和 LOQ 如表 2 所示。
表 2：122 种化合物的最低检出限及重现性（* 表示 IS）
选取部分化合物在 100ppt 时的色谱图：
图 4： 部分化合物 100 ppt 的色谱图
3.4 烟草中农残检测的方法包
想要快速建立方法时，直接拷贝方法包中的文件夹到 C:\ TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。
图 5：打开方法包
4. 结论：
应用 Thermo ScientificTM 三重四极杆串接气质联用仪 TSQ 8000 Evo，可以快速分析烟草中的农药残留。方法学验证表明，该 方法的线性、检出限、RSD 值均满足 YQ/T 47.1—2014 烟草及 烟草制品多种农药残留量的测定以及 YQ 50—2014 烟叶农药最 大残留限量的要求。应用 Thermo Fisher 方法包，可以快速建立进样方法和数据处理方法，拿来即用，无需从数据库中整合信息建立方法，而是直接用现成的方法，节省大量时间，提高分析效率。一级和二级高分辨质谱数据，保证了定性和定量结果的可靠性；媲美高端三重四极杆的灵敏度和宽线性范围可轻 松定量药物中的痕量杂质。与三重四极杆质谱相比，Q Exactive Focus 采用一级质谱定量不需要优化母离子，子离子参数，仅利
用目标化合物精密分子质量即可实现准确定量，更为方便快速。采用二级高分辨质谱定量可以记录子离子全扫描信息，通过在数据后处理中灵活的挑选更具有专属性的子离子进行定量，有效的排除基质干扰，选择性更好，灵敏度更高。
