PLA邻位连接技术实验常见问题解答

PLA 常见 FAQ

围绕 PLA（邻位连接技术）的实操，我们把客户问得最多的抗原修复、探针原理、试剂盒选型、酶封闭与组织样本验证等问题整理成一份 FAQ，方便快速对照查阅。

Q：什么是抗原修复？实验是否必须进行该步骤？

A：抗原修复是免疫组化、原位邻近连接技术（isPLA）等实验中关键的样本前处理步骤。组织经福尔马林固定时，蛋白间会形成亚甲基桥发生交联，遮蔽抗体识别所需的抗原表位；若不做抗原修复，抗体无法结合靶标，最终染色信号微弱甚至无信号。

Q：Flex Cell 推荐使用哪种封片剂？

A：优先推荐 Sigma 品牌 F6182 荧光封片剂；绝大多数适配免疫组化 / 免疫荧光的封片剂，均可搭配 系列产品使用。

Q：什么是 探针（bodies）？

A：探针是偶联寡核苷酸序列的抗体，也称为邻近探针。当两个 探针空间距离足够近时，寡核苷酸链可介导外加配对寡核苷酸环化，并启动滚环扩增（RCA）反应，最终生成长链 DNA，形成清晰可辨的信号斑点。

Q：如何选择适配的 Flex Cell 试剂盒？

A：Flex Cell 可检测蛋白互作、内源蛋白、蛋白修饰，支持相对定量，适用于固定细胞样本。可根据一抗宿主物种与荧光显微镜滤片组选型：

按一抗物种选型：搭配小鼠 + 兔源一抗，选用 Flex Cell MR；搭配山羊 + 小鼠源一抗，选用 Flex Cell GM（已停产）；搭配兔 + 山羊源一抗，选用 Flex Cell GR（已停产）。

按荧光滤片选型：Flex Cell RED 适配 Cy3 滤片组（最大激发 595 nm，最大发射 627 nm）；Flex Cell Atto647N 适配 Cy5 滤片组（最大激发 649 nm，最大发射 662 nm）。

Q：Bright 试剂盒包含哪些组分？

A：完成整套实验所需全部试剂均包含在内，仅封片剂需自备：Vector Laboratories 公司 VectorMount® Express 封片剂（货号 H-5700-60）。配套 HRP 体系试剂盒选用过氧化氢作为内源性酶封闭剂；注：Bright AP 试剂盒已停产。

Q：配套 二抗（bodies）来源于哪种宿主物种？

A：本产品二抗全部为驴源。

Q：什么场景优先选用 Flex Tissue，而非 Flex Cell？

A：Flex Tissue 专为组织样本开发，可提升检测灵敏度，同时消除部分样本中高发的高背景干扰。针对背景复杂、染色困难的组织，该试剂盒能实现理想信号数量与清晰成像效果；若实验对象是细胞样本，则更推荐 Flex Cell。

Q：Flex Tissue 针对组织切片 / 组织芯片（TMA）做了哪些优化？

A：整套实验流程与试剂均经过组织样本适配优化，检测灵敏度更高；自研专利封闭体系可大幅降低非特异性背景染色。

Q：Bright 该选用哪种酶封闭剂？

A：组织、细胞样本内含有内源过氧化物酶或碱性磷酸酶，若不提前封闭处理，会产生大量非特异性背景染色，需根据实验体系匹配对应封闭试剂：

Bright HRP 体系：使用过氧化氢（H₂O₂）封闭内源过氧化物酶；

Bright AP 体系：使用左旋咪唑封闭内源碱性磷酸酶（该试剂盒已停产）；

双酶封闭液可通用适配 Bright HRP 与 AP 两种体系。请严格遵循说明书流程完成切片封闭；封闭不充分会导致严重非特异背景信号。

Q：Flex Tissue 产品验证阶段测试过哪些组织样本？

A：Flex Tissue 在 FFPE 石蜡切片、人 / 小鼠新鲜冷冻切片完成验证；覆盖正常组织与肿瘤组织，包括结肠、扁桃体、卵巢、肾脏、乳腺、脾脏、脑、皮肤等。