CellFAB One MN平台助力5批单采血CD19 CAR-T全流程制备指标评估
CAR-T细胞制备涉及细胞清洗、分选、激活、转导、扩增、收获和终制剂等多个连续环节。传统工艺通常需要在不同设备之间转移物料，开放操作与人工干预较多，既增加了过程控制难度，也对场地、人员和批间一致性提出更高要求。
本次应用研究以5批新鲜单采血为起始材料，在赛桥CellFAB One MN平台上完成CD19 CAR-T细胞全流程制备。结果显示，系统能够在同一封闭平台内完成关键单元操作，并在T细胞纯度、CAR阳性率、扩增倍数、终产品活率及磁珠残留等指标上获得稳定结果。
一、从新鲜单采血到终产品
本次研究以新鲜单采血为起始材料，依托CellFAB One MN开展CD19 CAR-T细胞全流程制备。工艺周期共10天，依次完成生产准备、T细胞分选、激活、慢病毒转导、培养扩增，以及终产品收获与制剂配制，具体流程如下。
这套工艺的重点不仅在于完成全流程操作，更在于将原本分散于不同设备和人工环节中的关键单元整合至同一套封闭系统，并按照预设时间节点连续衔接。
二、CellFAB One MN用于CAR-T制备的耗材及液路配置示意图
在减少设备切换和开放式物料转移的同时，系统化运行也有助于降低人为操作差异，使关键步骤、过程参数和批次记录更加统一，为后续数据分析、工艺优化及不同批次间的比较提供更清晰的过程基础。
CD4/CD8T细胞分选
目标细胞分选是CAR-T制备的关键起始环节。分选结果不仅影响后续激活和转导效率，也会影响扩增过程及终产品的细胞组成。
本次研究中，5批新鲜单采血的起始CD3+ T细胞比例为54.1%至77.1%。经过CD4/CD8纳米磁珠分选后，CD3+ T细胞纯度达到95.47%至98.75%，5个批次均超过95%。
CD4⁺/CD8⁺ T细胞分选前后流式分析
另一组分选前后检测数据进一步评估了B细胞去除及细胞活率变化。结果显示，B细胞去除率超过90%，分选后B细胞残留低于0.2%；分选前后平均细胞活率分别为96.49%和95.10%，未观察到明显的活率下降。
T细胞分选后的B细胞去除效果及细胞活率评价
结果表明，该纳米磁珠分选工艺能够实现CD4+/CD8+ T细胞的有效富集，并在分选过程中保持较高的细胞活率，为后续激活、转导和扩增提供组成相对稳定的目标细胞群体。
三、基因修饰与细胞扩增
完成T细胞分选和激活后，研究采用CD19靶向慢病毒进行基因修饰，并在系统内继续完成细胞扩增。
5批细胞产品的CAR阳性率为48%至61%，平均为54.6%。不同批次均形成了明确的CAR阳性细胞群体，显示出细胞分选、激活与慢病毒转导环节之间较好的工艺衔接。细胞扩增倍数为13.3至23.1倍，最终细胞数量为3.00×10^9至6.90×10^9，其中3个批次的最终细胞数量超过5×10^9。
本次研究采用真实新鲜单采血，不同批次起始材料中的CD3+ T细胞比例和细胞组成存在一定差异。在此基础上，各批次均完成了目标细胞分选、基因修饰和体外扩增，并获得相对集中的终产品质量指标，体现了该工艺对不同起始材料的适配能力。
四、全流程细胞活率
CAR-T制备包含多次液体处理、细胞重悬、培养环境调整及磁珠操作。单一环节的细胞活率并不足以反映完整工艺对细胞状态的影响，因此有必要对细胞活率进行全过程观察。
全流程细胞活率受到流体路径、离心参数、换液方式、培养条件及工艺衔接等多方面因素影响。连续监测结果能够较为完整地反映自动化制备过程对细胞状态的综合影响。
5批终产品的细胞活率为90.2%至95.0%，平均为92.66%，所有批次均高于90%。这表明在经历分选、激活、慢病毒转导、扩增及收获等连续处理后，细胞仍保持了较好的活性状态。
本次研究持续监测了血液清洗、细胞分选、激活、转导、体外扩增、磁珠去除、收获及终制剂等阶段的细胞活率。结果显示，细胞活率在各工艺阶段总体保持稳定，未出现明显波动。
五、磁珠去除与终产品收获
磁珠分别用于目标细胞分选和细胞激活。在完成相应工艺功能后，需要对磁珠进行有效去除，以控制终产品中的磁珠残留。
CellFAB One MN通过磁性去除模块完成微珠分离，并在同一系统内继续进行细胞浓缩、终制剂配制及灌装。
5批终产品的磁珠残留量为每3×10^6个细胞中5至15个，均低于每3×10^6个细胞30个的设定标准。在不同细胞产量及扩增倍数下，终产品磁珠残留均维持在较低水平。
磁珠残留控制并非独立的末端工序，其结果同时受到前端磁珠用量、孵育条件、分选效率、细胞扩增状态及收获工艺的影响。本次数据表明，磁珠分选、细胞培养和磁珠去除能够在完整工艺流程中实现有效协同。
六、全封闭自动化工艺的价值
传统CAR-T生产通常通过多台设备分别完成离心、分选、培养、换液及终产品处理。设备之间的耗材连接、物料转移和参数切换主要依赖人工完成，由此增加了操作复杂度和过程差异。本次研究以5批新鲜单采血为起始材料，在CellFAB One MN平台上完成了从清洗到终制剂分装的全过程。
结果显示，在起始材料存在一定批次差异的情况下，各批次均获得了较高纯度的目标T细胞，并完成稳定的基因修饰与细胞扩增；经过连续多环节处理后，终产品细胞活率均保持在90%以上，磁珠残留量也低于预设标准。
上述结果表明，CellFAB One MN能够在同一封闭系统内衔接CAR-T细胞制备的多个关键工艺步骤，在减少设备切换和开放式操作的同时，保持不同批次间较为稳定的过程表现与终产品质量。该研究为CD19 CAR-T细胞自动化制备提供了具有参考价值的工艺数据，也为后续工艺优化、放大及不同应用场景下的适配奠定了基础。
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