TTR人源化小鼠应用于ATTR核酸药物体内药效评价模型
核酸药物走到体内药效评价这一步时，TTR 人源化小鼠是常被问到的一类工具。转甲状腺素蛋白（transthyretin，TTR）在血液中以四聚体形式存在，承担甲状腺素与视黄醇结合蛋白的转运功能，主要由肝脏合成并分泌入血。当 TTR 基因发生致病性变异，四聚体的稳定性下降，解离出的单体易发生错误折叠并聚集为淀粉样纤维，沉积于外周神经、心脏等组织，引起遗传性转甲状腺素蛋白淀粉样变（ATTRv）。V30M 是该病中报道较多的变异之一，常与多发性神经病表型相关；由于成熟蛋白与含信号肽的前体采用不同的氨基酸编号，同一变异在文献中也写作 p.V50M。
围绕这一靶点，降低肝脏TTR 产生量的核酸药物已成为重要的干预思路。但这类药物依赖与人源 TTR 序列的碱基互补配对，普通小鼠体内只有鼠源 Ttr 转录本，缺少可供作用的人源靶标；同时，野生型小鼠也不携带 V30M 变异，难以贴近患者的遗传背景开展评价。
品系构建
针对上述需求，研发人员利用同源重组，将小鼠Ttr 基因进行人源化修饰，并在其中引入 V30M（p.V50M）突变，获得hTTR-V30M(p.V50M) 小鼠。经此改造，小鼠体内表达携带该致病变异的人源序列 TTR。
图1.Detection of human TTR (A) and mouse TTR (B) expression in serum by ELISA
图2. Detection of human TTR levels in serum from hTTR-V30M(p.V50M) knock-in mice.
图3. Detection of human TTR expression in liver, kidney, brain and eye tissues by qPCR.
验证数据
血清表达验证。以ELISA 检测血清中人源 TTR（A）与小鼠 TTR（B）的水平（雄性，7–8 周龄，n=4）。结果表明，人源 TTR 仅在纯合 hTTR-V30M(p.V50M) 小鼠血清中检出，野生型对照小鼠血清中未检出；小鼠 TTR 则仅在野生型对照小鼠血清中检出，纯合敲入小鼠血清中未检出（图1）。这一组数据说明，内源转录本已由人源序列取代，血清中的循环蛋白来自人源靶标。
核酸药物体内药效验证。 9 周龄雄性纯合敲入小鼠分别给予 PBS 或 Vutrisiran，于给药前（D0）以及给药后第 7 天、第 28 天采集血清，以 ELISA 检测人源 TTR 水平（n=5，Mean±SEM，Unpaired t-test，p<0.0001）。结果表明，Vutrisiran 明显降低了血清人源 TTR 水平，且该降低在 4 周的观察期内持续维持（图2）。
组织选择性验证。同一给药方案下，于给药后第28 天取肝、肾、脑、眼组织提取 RNA，反转录后以人源 TTR 引物、小鼠 Gapdh 内参进行 qPCR，相对表达量以第 1 组小鼠的平均表达水平为基准换算（n=5，Mean±SEM，Unpaired t-test，ns 表示无显著性）。结果表明，Vutrisiran 仅在肝脏中降低人源 TTR mRNA 表达，肾、脑、眼组织中组间差异无显著性（图3）。
血清蛋白与肝脏转录本两个层面的读数相互印证，也与TTR 主要由肝脏合成的生理特征一致。
应用方向
基于上述验证数据，hTTR-V30M(p.V50M) 小鼠适用于靶向人源 TTR 的小干扰 RNA、反义寡核苷酸等核酸药物的体内药效评价，可用于考察血清人源 TTR 的降低幅度与维持时间；配合肝、肾、脑、眼等多组织的 qPCR 检测流程，也可用于候选分子的组织分布与作用选择性分析。由于该品系携带 V30M（p.V50M）致病变异，还可为 ATTRv 相关的机制研究与给药方案摸索提供动物层面的实验体系。 靶向人源TTR 的核酸药物，为什么要用携带 V30M 突变的人源化小鼠评价？
核酸药物依赖与人源序列的碱基互补配对，普通小鼠体内只有鼠源Ttr 转录本，也不携带致病变异。hTTR-V30M(p.V50M) 小鼠（目录号 NM-HU-220587）表达携带 V30M（p.V50M）变异的人源序列 TTR，可作为 ATTR 小鼠模型开展体内药效评价。验证数据显示，Vutrisiran 给药后血清人源 TTR 明显降低并在 4 周内维持，肝脏中的靶标 mRNA 同步下降。
hTTR-V30M(p.V50M)（目录号：NM-HU-220587）由南模生物研发。更多品系信息、完整验证数据与配套服务，欢迎访问南模生物官网（www.modelorg.com）查询，或联系我们获取技术资料。
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