根据多个核心期刊的投稿指南和最新要求,Western Blot(WB)的数据规范性和完整性已成为论文发表的重要审核标准
原始图像提交GAPDH的重复性使用
特别限制:JBC严禁拼接不同膜的条带,Cell要求重组泳道需说明处理方式
抗体信息与验证
需在方法部分详细描述抗体来源、种属、目录号及批次号,并提供特异性验证数据(如敲除/敲低实验)JBC要求新型抗体需提供抗原制备及验证流程。
内参与归一化
内参要求:目的蛋白与内参(如GAPDH、β-actin)需在同一膜上检测
定量分析:需说明信号强度定量方法,并验证信号与抗原量的线性关系
动态范围:避免使用胶片化学发光法(窄动态范围),推荐荧光成像系统(如LI-COR Odyssey)
对比度与曝光
禁止过度调整对比度导致背景丢失或条带信息掩盖,需保留灰色背景(高对比度图像可能被Nature拒稿,建议提供多曝光版本补充材料)
高对比度结果实例:
重复性要求:需提供至少3次独立实验的重复数据,并在图注中标注重复次数
统计展示:推荐以柱状图形式呈现目的蛋白与内参的比值,并标注统计学差异
期刊特殊要求示例
Nature:反对跨膜定量比较,若必须需标注平行实验条件
Cell:要求全膜显示所有非特异性条带,推荐总蛋白归一化
JBC:严格禁止拼接,要求抗体验证数据及原始扫描文件
PLOS:接收后需补交原始数据,裁剪图像需解释无关条带
(国内大多数期刊已经沿用相关国际期刊标准)