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天信和固定床生物反应器贴壁细胞培养操作指南
点击次数:599 发布日期:2022-3-7  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
     固定床生物反应器由于其剪切力低、操作稳定,便于控制等优点被广泛地应用于贴壁细胞的培养。使用天信和Cellcomb载体在固定床生物反应器中培养细胞,可延长培养过程中连续灌流的时间,提高生产率,轻松实现细胞的高密度大规模培养。

    下面为大家详解天信和固定床生物反应器贴壁细胞培养操作步骤,以便您更好地理解贴壁细胞的操作过程。


操作步骤详解
 

一、清洗固定床生物反应器

1. 拧掉顶盖上的密封螺丝,取出罐体顶盖和固定篮;

2. 用纯化水冲洗玻璃罐内外壁和法兰盘;

3. 用柔软纱布擦洗罐体内部;

4. 反复冲洗固定筛片、套管、深层通气管等;

5. 用柔软纱布擦洗电极、桨叶等所有组件;

6. 用注射用水冲洗罐体内外壁和所有组件。
 

二、安装固定床生物反应器

1. 倒入已经完全膨胀、湿润的Cellcomb载体;

2. Cellcomb载体分布均匀后,下调固定篮上筛片,然后拧紧固定螺丝;

3. 倒入pH为7.4左右的PBS溶液清洗1次;

4. 再次倒入PBS溶液沒过载体、电极;

5. 安装好顶盖并拧紧螺丝;

6. 安装工艺软管并用止血钳夹紧软管;

7. 气密性检查:通入压缩空气,罐内压力升到0.5bar左右,停止通气并夹紧进气软管,放置6h检查罐体内的气压,6h后压力表没有变化,则表示气密性良好;

8. 高压灭菌:打开尾气、表层进气管路上止血钳,将罐体及所有组件进行高压灭菌,灭菌程序为敞口液体程序121℃,45分钟;

9. 灭菌结束后取出罐体,并放置至室温;

10. 将反应器罐体与控制器连接,连接温度、DO、pH、加热毯、搅拌电机等;

11. 在无菌环境下将反应器与废液桶、培养液桶、接种瓶等连接;

12. 接入压缩空气,将反应器罐内PBS通过管路排至废液桶,用细胞培养液清洗载体2次;

13. 再次加入细胞培养液,沒过搅拌桨叶、pH电极等,调整反应器参数,进行细胞预培养。
 

三、细胞贴壁培养

1. 接入待培养的动物细胞;

2. 将温度设置为37℃,溶氧为40%,pH值为7.0左右进行细胞培养;

3. 每24小时在线取样一次,进行生化检测和pH值测量;

温馨提示:共取两管样品,第一管废弃,只保留第二管样品;液体单向流动,只出不进。

4. 取样后将取样管末端浸入75%的酒精。

温馨提示:每24小时或每次操作都需填写生物反应器操作记录
 

四、下罐操作

1. 关掉控制面板上的所有的自动控制,只保留搅拌功能;

2. 用止血钳夹住深层进气和尾气出气,开启表层进气,并调节进气流量;

3. 拆掉加热毯,关掉搅拌功能,松开进气管道;

4. 将罐内培养液排入废液桶;

5. 排液完成后,夹紧进气管道和排液管道;

6. 断开电极与控制柜的连接,拆掉所有管路和附件;

7. 拆掉顶盖螺丝,打开顶盖,拧掉固定篮上的螺丝,取出上筛片;

8. 取样:分别在上层、中层及下层各取0.5g Cellcomb载体样品;

9. 在Cellcomb载体样品中加入10ml结晶紫,将加入结晶紫的载体样品放入摇床中(过夜后进行细胞计数);

10. 用纯化水反复冲洗反应器固定筛片,并用柔软纱布擦洗,仔细冲洗、擦拭罐体内外壁、浆叶及其他组件;

11. 清洗完成后拧上顶盖螺丝,罐体内装满0.1M的氢氧化钠浸泡过夜。

五、细胞计数

过夜后对Cellcomb载体样品进行细胞计数:

1. 从摇床中取出载体样品并充分摇晃;

2. 在EP管内加入PBS溶液,将样品移入EP管中进行稀释;

3. 用移液枪反复吹打细胞悬液;

4. 将稀释后的细胞悬液打在细胞计数板上;

5. 在显微镜下进行细胞计数。


观看操作视频

请关注微信公众号“天信和生物”,回复“固定床”即可查看详细的固定床生物反应器贴壁细胞培养操作视频。


 

中生天信和——国药集团·中国生物旗下子公司,致力于为中国生物制药产业提供领先的生物制药过程支撑技术,提升中国生物制药上游原材料以及装备的自主可控能力,加快生物制药产业发展。
 

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个性化细胞培养基开发与生产

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生物制药过程工艺技术开发


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来源:天信和(苏州)生物科技有限公司
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