Fgl2敲除抑制Rack1介导AKT磷酸化调控B细胞黏膜免疫的研究
黏膜是机体抵御病原体的第一道防线，其中固有层浆细胞分泌的分泌型免疫球蛋白A（secretory IgA, sIgA）尤为重要。纤维蛋白原样蛋白2（fibrinogen-like protein 2, Fgl2）是一种重要的免疫调节分子，既往研究发现它可结合B细胞表面的FcγRIIB，限制B细胞存活与类别转换重组。然而，Fgl2在B细胞内部如何发挥作用、又怎样影响黏膜免疫，一直不明确。
Fgl2缺失增强肠道黏膜抗感染免疫
旋毛虫（Trichinella spiralis）感染小鼠脾脏中Fgl2表达下降、IgA表达升高。在Fgl2-KO小鼠的肠道感染模型中，脾脏、肠系膜淋巴结（mesenteric lymph nodes, mLN）与派尔集合淋巴结（Peyer's patches, PPs）的生发中心（germinal center, GC）B细胞和浆细胞比例明显升高，IgA阳性浆细胞在三个部位均增加，十二指肠黏膜的sIgA产生增强。类别转换方面，IgG1仅在mLN中升高，而IgG2b、IgA与IgE在三个部位均升高。Fgl2-KO小鼠也未出现感染后常见的黏膜水肿损伤与隐窝变浅，十二指肠虫荷明显下降。
值得注意的是，这一优势并未延续到肌期。感染五周后，Fgl2-KO小鼠脾脏GC B细胞崩解，IgG2b与IgA类别转换明显减少，而IgG1、IgG3与IgE的类别转换无明显差异；浆细胞与IgA阳性浆细胞的数量则继续增加。
Fgl2缺失重塑脾脏B细胞图谱并放大BCR信号
对8周龄小鼠脾细胞开展单细胞转录组与B细胞受体测序，研究团队在Fgl2-KO小鼠中识别出四个无法归入经典亚群的B细胞群。恒定区克隆分析显示，其中一个亚群以IGHA、IGHM、IGHD为优势克隆，另外三个亚群与浆细胞则只有IGHA一种优势克隆。这些具有IGHA克隆异质性的B细胞高表达Ccl5、Gzma与Gzmb，同时高表达多个耗竭相关分子。
稳态条件下，Fgl2-KO小鼠脾脏T2、边缘区（marginal zone, MZ）与GC B细胞的比例和数量高于野生型，T1 B细胞则更低；滤泡B细胞的比例在两组间没有差异，但绝对数量更高。骨髓嵌合实验表明，上述分化改变是B细胞内在的。信号层面，Fgl2-KO B细胞在可溶性抗原刺激后pY、pSyk、pBtk、pSHIP-1与pWASP、DOCK8水平升高，钙动员增强，铺展能力更强。
Fgl2与Rack1结合，压低AKT磷酸化
研究团队通过酵母双杂交筛选锁定Rack1，并以免疫共沉淀和GST pull-down实验验证了两者的结合；结构模拟提示，二者之间形成多对氢键。共聚焦观察还发现，Rack1在Fgl2充足的B细胞中围绕核仁呈环状分布，Fgl2缺失时这一结构消失。
代谢层面，Fgl2-KO B细胞中多种糖酵解产物与延胡索酸水平升高，琥珀酸无差异；ATP产生与最大呼吸能力高于野生型，糖酵解能力则下降。信号检测显示，Fgl2-KO B细胞中p-PI3K与p-mTOR降低，p-AKT、p-S6与p-FOXO1却升高。体外以Rack1抑制剂Harringtonolide预处理后，Fgl2-KO B细胞中Rack1、p-AKT与p-BTK的活化受到抑制；加入重组Fgl2蛋白同样产生影响，但作用弱于该抑制剂。体内连续28天腹腔注射该抑制剂的Fgl2-KO小鼠，脾脏MZ B细胞、GC B细胞与IgA阳性浆细胞比例明显回落，脾B细胞的Rack1与p-AKT水平也低于生理盐水组。
人群样本中的一致证据
研究团队进一步以新冠病毒感染早期、出现上呼吸道感染症状的患者作为临床队列。与健康人相比，患者外周血B细胞比例升高，B细胞内IgA与Rack1表达上调、Fgl2下调；各B细胞亚群水平普遍升高，唯有记忆B细胞明显降低。用Rack1抑制剂预处理患者外周血单个核细胞后再行刺激，p-AKT、p-BTK与p-SYK水平较未处理组降低。
综上所述，此研究勾勒出一条Fgl2结合Rack1、抑制AKT磷酸化、约束BCR信号与B细胞代谢分化的通路，并在旋毛虫肠道感染模型与新冠感染早期患者样本中取得一致证据。作者提示，Fgl2在感染免疫与黏膜免疫中具有作为治疗靶点的潜力；而Fgl2缺失带来的黏膜免疫优势未能延续到肌期，其中B细胞自身与其他细胞、细胞因子的作用还有待进一步探究。
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