紫外分光光度法测定大豆总异黄酮的含量
摘要：为建立一种检测食物中大豆异黄酮含量的快速分析方法，以大豆中的活性成分金雀异黄素为标准品，在其紫外最大吸收峰259nm处测定大孔吸附树脂法配合溶剂法提取制得的大豆异黄酮试样的含量，大豆异黄酮试样中总异黄酮的含量以金雀异黄素计算为38.7％。平均加样回收率为99.86％，相对标准偏差为2.6％，方法简便，重现性好，可作为检测大豆异黄酮含量的一种手段。
1材料和方法
1.1仪器与试剂 紫外可见分光光度计；金雀异黄素标准品，含量为99.999％；95％乙醇（AR）。
试样 大孔吸附树脂吸附纯化后提取制得的大豆异黄酮提取物，浅黄棕色粉末，味苦。标准品溶液的配制精密称取金雀异黄素标准品5.2mg，置入25mL容量瓶中，以95％乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀。
试样溶液的配制 精密称取大豆异黄酮纯化物10.4mg，置入50mL容量瓶中，以95％乙醇解，并定容至刻度，摇匀。
1.2标准品及试样紫外吸收峰的扫描比较 将标准品及试样溶液在光谱仪上扫描200～400nm处的吸收情况，结果发现标准品及试样的最大吸收峰都在259nm，且最大吸收峰周围干扰较少。
1.3校正曲线的制备 精密吸取0.05、0.10、0.15、0.20、0.30、0.40mL标准品溶液分别置于10mL容量瓶中，并各加95％乙醇1.0mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以1mL95％乙醇加水到10mL作空白对照，在259nm处测得吸光度，以测得的吸光度与纯品量得出校正曲线方程，见表1。
回归方程y＝0.2006＋7.8118x，r＝0.9996
1.4试样中大豆总异黄酮含量的测定 分别精密吸取试样液0.3mL于3只10mL容量瓶中，以下照校正曲线制备项下操作，在259nm处测定吸光度，计算平均值，按校正曲线方程计算含量，并计算试样的大豆异黄酮百分含量，结果见表2。
因此，试样中大豆异黄酮的百分含量（以金雀异黄素计算）为38.7％。
2结果
精密度试验精密吸取标准品溶液0.2mL，分别置5只10mL容量瓶中，照校正曲线项下操作，测定吸收度，RSD为2.6％。
回收率试验精密吸取0.1、0.2、0.1、0.2、0.2mL标准品溶液于5只10mL容量瓶中，再分别精密加入试样液0.3mL，照校正曲线制备项下操作，计算加样回收率，结果见表3。
3讨论
金雀异黄素为5，7，4—三羟基异黄酮，含有多个共轭结构。分析推测其可能具有紫外吸收，经测定，其在259nm处有最大吸收，与标准品紫外吸收峰比较，试样液也在此波长处有最大吸收，因此确定含量测定波长为259nm。
本测定方法参照中国药典1995年版一部葛根项下葛根及其制剂中异黄酮含量测定的方法，因为葛根和大豆均为豆科植物，其中的黄酮类成分均属于异黄酮成分，且结构相似，中药葛根中含有大豆素、黄豆黄素、大豆甙，大豆中也含此类成分。因此参照葛根中异黄酮测定方法选用紫外分光光度法测定大豆异黄酮的含量，该方法简单、快速，适用于所有含大豆异黄酮的保健食品和保健药品的质量检测和测定。
如果测定试样为保健食品，参照文献方法，可低温真空或冷冻干燥后，精密称取一定量的干燥试样，置于索氏提取器中，以甲醇回流提取，提取物浓缩、干燥后，以95％乙醇定容即可。
文章来源：
[1]张玉梅,孙学斌,高旭年,等.紫外分光光度法测定大豆总异黄酮的含量[J].中国食品卫生杂志,2000,(04):7-9.DOI:10.13590/j.
cjfh.2000.04.002.
1材料和方法
1.1仪器与试剂 紫外可见分光光度计；金雀异黄素标准品，含量为99.999％；95％乙醇（AR）。
试样 大孔吸附树脂吸附纯化后提取制得的大豆异黄酮提取物，浅黄棕色粉末，味苦。标准品溶液的配制精密称取金雀异黄素标准品5.2mg，置入25mL容量瓶中，以95％乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀。
试样溶液的配制 精密称取大豆异黄酮纯化物10.4mg，置入50mL容量瓶中，以95％乙醇解，并定容至刻度，摇匀。
1.2标准品及试样紫外吸收峰的扫描比较 将标准品及试样溶液在光谱仪上扫描200～400nm处的吸收情况，结果发现标准品及试样的最大吸收峰都在259nm，且最大吸收峰周围干扰较少。
1.3校正曲线的制备 精密吸取0.05、0.10、0.15、0.20、0.30、0.40mL标准品溶液分别置于10mL容量瓶中，并各加95％乙醇1.0mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以1mL95％乙醇加水到10mL作空白对照，在259nm处测得吸光度，以测得的吸光度与纯品量得出校正曲线方程，见表1。
回归方程y＝0.2006＋7.8118x，r＝0.9996
1.4试样中大豆总异黄酮含量的测定 分别精密吸取试样液0.3mL于3只10mL容量瓶中，以下照校正曲线制备项下操作，在259nm处测定吸光度，计算平均值，按校正曲线方程计算含量，并计算试样的大豆异黄酮百分含量，结果见表2。
因此，试样中大豆异黄酮的百分含量（以金雀异黄素计算）为38.7％。
2结果
精密度试验精密吸取标准品溶液0.2mL，分别置5只10mL容量瓶中，照校正曲线项下操作，测定吸收度，RSD为2.6％。
回收率试验精密吸取0.1、0.2、0.1、0.2、0.2mL标准品溶液于5只10mL容量瓶中，再分别精密加入试样液0.3mL，照校正曲线制备项下操作，计算加样回收率，结果见表3。
3讨论
金雀异黄素为5，7，4—三羟基异黄酮，含有多个共轭结构。分析推测其可能具有紫外吸收，经测定，其在259nm处有最大吸收，与标准品紫外吸收峰比较，试样液也在此波长处有最大吸收，因此确定含量测定波长为259nm。
本测定方法参照中国药典1995年版一部葛根项下葛根及其制剂中异黄酮含量测定的方法，因为葛根和大豆均为豆科植物，其中的黄酮类成分均属于异黄酮成分，且结构相似，中药葛根中含有大豆素、黄豆黄素、大豆甙，大豆中也含此类成分。因此参照葛根中异黄酮测定方法选用紫外分光光度法测定大豆异黄酮的含量，该方法简单、快速，适用于所有含大豆异黄酮的保健食品和保健药品的质量检测和测定。
如果测定试样为保健食品，参照文献方法，可低温真空或冷冻干燥后，精密称取一定量的干燥试样，置于索氏提取器中，以甲醇回流提取，提取物浓缩、干燥后，以95％乙醇定容即可。
文章来源：
[1]张玉梅,孙学斌,高旭年,等.紫外分光光度法测定大豆总异黄酮的含量[J].中国食品卫生杂志,2000,(04):7-9.DOI:10.13590/j.
cjfh.2000.04.002.
