THUNDER均相TR-FRET技术在IL4R靶向药研发全流程中的应用
IL-4 结合细胞膜上 IL4 受体后，激活 JAK-STAT6、PI3K、MAPK 多条信号通路，广泛参与过敏性炎症、肿瘤增殖、自身免疫紊乱等多种疾病进程。目前全球已有多款 IL4R 靶向药上市，国内多款单抗推进至 II/III 期，国产管线加速追赶进口品种。在候选药物高通量筛选环节，THUNDER 均相 TR-FRET 技术贯穿分子结合、通路磷酸化、细胞因子检测全流程。
一、海内外药物研发布局
二、靶点覆盖多类疾病
1.过敏性疾病：哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、鼻息肉、嗜酸粒细胞性食管炎、食物过敏均由 IL4/IL13 介导 II 型炎症，靶向 IL4R 可抑制 IgE 生成、减轻过敏症状；
2.恶性肿瘤：乳腺癌、胃癌、结直肠癌等上皮癌高表达 II 型 IL4R，通路活化促进癌细胞增殖、诱导 M2 型肿瘤相关巨噬细胞；
3.自身免疫病：类风湿关节炎、银屑病关节炎发病和 IL4/IL13 调控失衡相关；
4.神经及其他病症：IL4 调控中枢炎症，参与抑郁、脑修复，还关联骨质疏松、艾滋病进展。
三、THUNDER 均相 TR-FRET 三大核心应用场景
1、IL4 与 IL4R 体外分子结合筛选
试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 IL4 与 IL4R 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。Eu 标记的抗 Tag1 抗体（供体）和 Acceptor 标记的 IL4 蛋白（受体），IL4 与 IL4R 结合介导供体与受体靠近，供体受激发后触发 FRET，665nm 产生特征信号。加入抑制剂或阻断剂，复合物解离，信号下降，依托读数测算 IC50，大批量筛选拮抗类候选分子。同步配套 IL13/IL13R 结合检测试剂盒，满足双靶点筛选需求。
THUNDER TR-FRET 采用经典的双抗夹心检测模型检测 STAT6 水平，两个标记了荧光 Eu 和 FR 的抗体分别识别 STAT6 磷酸化表位和稳定区表位，抗体结合拉进荧光基团，320nm 激发后进而产生 FRET（荧光共振能量转移），从而在 665nm 检测荧光信号值。THUNDER 检测技术特异性好，灵敏度高，重复性好，通量高，操作简单，抗体孵育仅需 2-4h，手动 15min 即可完成实验。
实验可选用 HeLa、THP-1 细胞：梯度 IL-4 给药可得到 STAT6 磷酸化激动 EC50；先用 IL-4 刺激，再加梯度 JAK 抑制剂，测得药物抑制 IC50，从磷酸化变化验证化合物对 IL4 通路的阻断能力，是靶点机制研究首选方案。
以 Human CCL17/TARC 为例，THUNDER 细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的 CCL17 抗体 Eu-Ab1 和 FR-Ab2，分别与细胞上清中 CCL17 结合，产生能量共振转移 FRET（615nm），进而产生 665nm 荧光信号，荧光信号强度与 CCL17 浓度成正比。全程仅需 1h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽，Human CCL17 检测范围：2.4-30,000pg/ml。同时可批量检测 IL-4、IL-5、IL-13、IgE 等过敏关键标志物，直观评价候选药物体外抗炎抗过敏药效。
一、海内外药物研发布局
| 药企 | 在研品种 | 靶点 | 临床阶段 |
|---|---|---|---|
| 赛诺菲 + 再生元 | 度普利尤单抗 | IL4Rα | 全球获批，多适应症 |
| 辉瑞 | 三特异性单抗 | IL4R/IL13R/TSLP | I 期临床 |
| 康诺亚 + 石药 | 司普奇拜单抗 | IL4Rα | III 期临床 |
| 三生国健 | SSGJ-611 | IL4Rα | II 期临床 |
二、靶点覆盖多类疾病
1.过敏性疾病：哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、鼻息肉、嗜酸粒细胞性食管炎、食物过敏均由 IL4/IL13 介导 II 型炎症，靶向 IL4R 可抑制 IgE 生成、减轻过敏症状；
2.恶性肿瘤：乳腺癌、胃癌、结直肠癌等上皮癌高表达 II 型 IL4R，通路活化促进癌细胞增殖、诱导 M2 型肿瘤相关巨噬细胞；
3.自身免疫病：类风湿关节炎、银屑病关节炎发病和 IL4/IL13 调控失衡相关；
4.神经及其他病症：IL4 调控中枢炎症，参与抑郁、脑修复，还关联骨质疏松、艾滋病进展。
三、THUNDER 均相 TR-FRET 三大核心应用场景
1、IL4 与 IL4R 体外分子结合筛选
试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 IL4 与 IL4R 之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。Eu 标记的抗 Tag1 抗体（供体）和 Acceptor 标记的 IL4 蛋白（受体），IL4 与 IL4R 结合介导供体与受体靠近，供体受激发后触发 FRET，665nm 产生特征信号。加入抑制剂或阻断剂，复合物解离，信号下降，依托读数测算 IC50，大批量筛选拮抗类候选分子。同步配套 IL13/IL13R 结合检测试剂盒，满足双靶点筛选需求。
图左：Immobilized IL-4, Human (Cat.No.UA040026)at 1.5μg/mL(100μL/well)can bind Biotinylated IL-4R alpha/CD124 Avi&His Tag,Human(Cat.No.UA010671)with EC50 of 12.51-16.32ng/mL。
图右：Immobilized Biotinylated IL-4R alpha/CD124 Avi&His Tag, Human(Cat.No.UA010671)at 2.0μg/mL(100μL/well)can bind Dupilumab(Cat.No.UA010946)with EC50 of5.78-7.91ng/mL.
2、下游 STAT6 磷酸化蛋白检测THUNDER TR-FRET 采用经典的双抗夹心检测模型检测 STAT6 水平，两个标记了荧光 Eu 和 FR 的抗体分别识别 STAT6 磷酸化表位和稳定区表位，抗体结合拉进荧光基团，320nm 激发后进而产生 FRET（荧光共振能量转移），从而在 665nm 检测荧光信号值。THUNDER 检测技术特异性好，灵敏度高，重复性好，通量高，操作简单，抗体孵育仅需 2-4h，手动 15min 即可完成实验。
实验可选用 HeLa、THP-1 细胞：梯度 IL-4 给药可得到 STAT6 磷酸化激动 EC50；先用 IL-4 刺激，再加梯度 JAK 抑制剂，测得药物抑制 IC50，从磷酸化变化验证化合物对 IL4 通路的阻断能力，是靶点机制研究首选方案。
以 Human CCL17/TARC 为例，THUNDER 细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的 CCL17 抗体 Eu-Ab1 和 FR-Ab2，分别与细胞上清中 CCL17 结合，产生能量共振转移 FRET（615nm），进而产生 665nm 荧光信号，荧光信号强度与 CCL17 浓度成正比。全程仅需 1h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽，Human CCL17 检测范围：2.4-30,000pg/ml。同时可批量检测 IL-4、IL-5、IL-13、IgE 等过敏关键标志物，直观评价候选药物体外抗炎抗过敏药效。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| Human IL4 | UA040026 | 10ug |
| Phospho-STAT6 (Y641) | KIT-HP-STAT6P-500 | 500 pionts |
| STAT6 Total | KIT-HP-STAT6T-50 |
