均相TR-FRET检测技术在MASH新药研发中的应用
代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）是由肥胖、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱诱发的慢性肝病，疾病进程从肝脏脂肪堆积逐步发展为慢性炎症、肝细胞坏死，最终可诱发肝纤维化、肝硬化甚至肝癌。据流行病学统计，全球超十亿人群受代谢相关脂肪肝困扰，其中数千万患者进展至中重度 MASH，以往临床上长期缺少针对性治疗药物。2024 年、2025 年两款标志性药物接连获批，THR-β、GLP-1、FGF21 等热门靶点进入临床集中兑现阶段，国内外药企纷纷布局管线。在候选分子大批量筛选、药理药效验证环节，THUNDER 均相 TR-FRET 检测技术凭借综合性能优势，成为全流程标配检测方案。
一、MASH 四大主流靶点机制与全球研发进展
MASH 发病机制错综复杂，涉及脂质代谢紊乱、慢性炎症浸润、肝星状细胞异常活化、肠肝轴失衡、胶原过度沉积五大病理环节，药物研发围绕四类靶点同步推进，各靶点作用逻辑与临床进展整理如下：
两款里程碑获批药物
瑞美替罗（Resmetirom，THR-β 激动剂）：全球首款 MASH 专用治疗口服药，精准富集肝脏组织，规避甲状腺相关全身副作用，从源头改善肝细胞脂质代谢异常，是 THR-β 靶点研发的标杆产品。
司美格鲁肽（GLP-1RA）：原本用于降糖减重，2025 年新增 MASH 适应症，依靠系统性减重、改善胰岛素抵抗实现肝脏脂肪消退，也是目前临床应用最广泛的 MASH 治疗药物。
二、MASH 药物全流程药效评价：优选 THUNDER 均相 TR-FRET 技术
在 MASH 候选药物研发中，需要大批量检测炎症因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）、纤维化标志物（COL1A1、α-SMA）以及 PI3K-AKT、p53 等关键通路磷酸化蛋白，以此评判化合物的抗炎、降脂、抗纤维化活性。对比传统 WB、分步 ELISA 方法，均相 TR-FRET 是现阶段高通量药物筛选的最优选择，整套实验体系无需洗板，一站式完成多指标测定。
TR-FRET 五大核心应用优势
全均相免洗体系：省去反复洗板、换液操作，规避洗板带来的样本损耗、孔间误差，极大降低人工操作工作量，适合大批量化合物筛选；
实验周期短：细胞因子检测仅需 1 小时，胞内磷酸化蛋白检测控制在 4 小时以内，大幅缩短单批次筛选周期；
超高灵敏度与宽广线性区间：IL-6、IL-1β 等指标检出下限可达 pg 级别，高低浓度样本都能落在标准曲线范围内，适配高低活性候选分子定量；
完美适配高通量筛选：兼容 96 孔、384 孔高通量微孔板，单轮可完成上百个化合物药效筛查，满足药企大规模化合物库筛选需求；
一技多用，覆盖全指标：同一技术原理，既能定量上清中细胞因子浓度，又可检测细胞裂解液内磷酸化 / 总蛋白水平，一套平台即可覆盖 MASH 药物从靶点结合、通路调控到细胞表型验证全环节。
三、具体应用场景
1、体外细胞水平抗炎筛选
实验采用原代肝细胞、人肝星状细胞（HSC）或 HepG2 肝细胞模型，先用游离脂肪酸、LPS、TGF-β 复合造模，模拟 MASH 体内肝脏炎症微环境；之后梯度加入不同浓度受试小分子或多肽候选药物，在规定培养时长后收集细胞培养上清。利用 THUNDER TR-FRET 双夹心体系，分别定量上清中 IL-6、TNF-α、IL-1β 三种经典促炎因子含量。通过和空白模型组、阳性药对照组对比，计算候选药物对炎症因子释放的抑制率与 IC50 数值，快速筛选出抗炎活性优异的化合物。相较于传统 ELISA，TR-FRET 无需多次洗板，1 小时即可完成整板检测，384 孔板可一次性完成数十个化合物梯度浓度筛选，大幅加快 MASH 抗炎药物初筛效率。
2、抗纤维化活性验证
肝星状细胞异常活化是 M 进展至肝纤维化的核心诱因，活化后的 HSC 会大量合成 α-SMA 与 I 型胶原蛋白（COL1A1）。体外实验选用 LX-2 人肝星状细胞，经 TGF-β1 诱导造模促使细胞向纤维化表型转化，加入不同梯度受试药物孵育处理；结束后裂解细胞，使用 TR-FRET 试剂盒分别检测胞内 α-SMA、COL1A1 蛋白表达量。根据标志物下降幅度，量化药物抑制胶原合成、阻断 HSC 活化的能力，筛选具备抗纤维化潜力的候选分子。该方法均相操作、重复性佳，同一块微孔板可同步批量筛选抗纤维化候选，为 FGF21、PPAR 等靶点药物的体外药效评价提供标准化数据。
3、通路机制研究
THR-β、GLP-1、FGF21 类药物大多通过 PI3K-AKT、p53 通路调控脂代谢、炎症与纤维化进程。药物处理造模肝细胞后裂解细胞，采用 THUNDER TR-FRET 磷酸化试剂盒，同步检测磷酸化 AKT (S473)、总 AKT、磷酸化 p53 (S15)、总 p53四项指标，通过磷酸化蛋白 / 总蛋白比值变化，直观判定受试药物能否上调或下调目标通路活性。依靠蛋白磷酸化变化规律，明确候选药物具体作用靶点与胞内调控通路，区分化合物是直接靶向受体还是间接调控下游信号，完善候选药物的作用机理研究，为后续体内动物实验设计提供数据支撑。整套磷酸化检测仅需 4 小时，对比 WB 批量定量更高效，适合大批量机制筛选。
一、MASH 四大主流靶点机制与全球研发进展
MASH 发病机制错综复杂，涉及脂质代谢紊乱、慢性炎症浸润、肝星状细胞异常活化、肠肝轴失衡、胶原过度沉积五大病理环节，药物研发围绕四类靶点同步推进，各靶点作用逻辑与临床进展整理如下：
两款里程碑获批药物
瑞美替罗（Resmetirom，THR-β 激动剂）：全球首款 MASH 专用治疗口服药，精准富集肝脏组织，规避甲状腺相关全身副作用，从源头改善肝细胞脂质代谢异常，是 THR-β 靶点研发的标杆产品。
司美格鲁肽（GLP-1RA）：原本用于降糖减重，2025 年新增 MASH 适应症，依靠系统性减重、改善胰岛素抵抗实现肝脏脂肪消退，也是目前临床应用最广泛的 MASH 治疗药物。
二、MASH 药物全流程药效评价：优选 THUNDER 均相 TR-FRET 技术
在 MASH 候选药物研发中，需要大批量检测炎症因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）、纤维化标志物（COL1A1、α-SMA）以及 PI3K-AKT、p53 等关键通路磷酸化蛋白，以此评判化合物的抗炎、降脂、抗纤维化活性。对比传统 WB、分步 ELISA 方法，均相 TR-FRET 是现阶段高通量药物筛选的最优选择，整套实验体系无需洗板，一站式完成多指标测定。
TR-FRET 五大核心应用优势
全均相免洗体系：省去反复洗板、换液操作，规避洗板带来的样本损耗、孔间误差，极大降低人工操作工作量，适合大批量化合物筛选；
实验周期短：细胞因子检测仅需 1 小时，胞内磷酸化蛋白检测控制在 4 小时以内，大幅缩短单批次筛选周期；
超高灵敏度与宽广线性区间：IL-6、IL-1β 等指标检出下限可达 pg 级别，高低浓度样本都能落在标准曲线范围内，适配高低活性候选分子定量；
完美适配高通量筛选：兼容 96 孔、384 孔高通量微孔板，单轮可完成上百个化合物药效筛查，满足药企大规模化合物库筛选需求；
一技多用，覆盖全指标：同一技术原理，既能定量上清中细胞因子浓度，又可检测细胞裂解液内磷酸化 / 总蛋白水平，一套平台即可覆盖 MASH 药物从靶点结合、通路调控到细胞表型验证全环节。
三、具体应用场景
1、体外细胞水平抗炎筛选
实验采用原代肝细胞、人肝星状细胞（HSC）或 HepG2 肝细胞模型，先用游离脂肪酸、LPS、TGF-β 复合造模，模拟 MASH 体内肝脏炎症微环境；之后梯度加入不同浓度受试小分子或多肽候选药物，在规定培养时长后收集细胞培养上清。利用 THUNDER TR-FRET 双夹心体系，分别定量上清中 IL-6、TNF-α、IL-1β 三种经典促炎因子含量。通过和空白模型组、阳性药对照组对比，计算候选药物对炎症因子释放的抑制率与 IC50 数值，快速筛选出抗炎活性优异的化合物。相较于传统 ELISA，TR-FRET 无需多次洗板，1 小时即可完成整板检测，384 孔板可一次性完成数十个化合物梯度浓度筛选，大幅加快 MASH 抗炎药物初筛效率。
2、抗纤维化活性验证
肝星状细胞异常活化是 M 进展至肝纤维化的核心诱因，活化后的 HSC 会大量合成 α-SMA 与 I 型胶原蛋白（COL1A1）。体外实验选用 LX-2 人肝星状细胞，经 TGF-β1 诱导造模促使细胞向纤维化表型转化，加入不同梯度受试药物孵育处理；结束后裂解细胞，使用 TR-FRET 试剂盒分别检测胞内 α-SMA、COL1A1 蛋白表达量。根据标志物下降幅度，量化药物抑制胶原合成、阻断 HSC 活化的能力，筛选具备抗纤维化潜力的候选分子。该方法均相操作、重复性佳，同一块微孔板可同步批量筛选抗纤维化候选，为 FGF21、PPAR 等靶点药物的体外药效评价提供标准化数据。
3、通路机制研究
THR-β、GLP-1、FGF21 类药物大多通过 PI3K-AKT、p53 通路调控脂代谢、炎症与纤维化进程。药物处理造模肝细胞后裂解细胞，采用 THUNDER TR-FRET 磷酸化试剂盒，同步检测磷酸化 AKT (S473)、总 AKT、磷酸化 p53 (S15)、总 p53四项指标，通过磷酸化蛋白 / 总蛋白比值变化，直观判定受试药物能否上调或下调目标通路活性。依靠蛋白磷酸化变化规律，明确候选药物具体作用靶点与胞内调控通路，区分化合物是直接靶向受体还是间接调控下游信号，完善候选药物的作用机理研究，为后续体内动物实验设计提供数据支撑。整套磷酸化检测仅需 4 小时，对比 WB 批量定量更高效，适合大批量机制筛选。
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Human IL-1β |
100ug |
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FGF21 |
100ug |
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Phospho-AKT pan (S473) TR-FRET Assay |
500 points |
