溶瘤病毒、质粒/病毒载体的生产工艺及流程

基因治疗，也称为细胞和基因治疗(Cell and GeneTherapy)，是一种利用基因治疗载体将外源治疗性基因转导至细胞，再通过外源基因的转录和翻译，改变细胞原有基因表达从而达到治疗疾病的目的。目前，国内基于基因治疗的生产工艺主要涉及两个方向，第一类即基于溶瘤病毒进行相关药物开发，第二类即基于质粒/病毒载体介导的基因疗法。
 

溶瘤病毒不仅可以发挥直接由病毒介导的肿瘤细胞杀伤功能，也能通过破坏肿瘤血管系统从而达到间接杀伤肿瘤的目的。对于基因治疗中的腺病毒AAV载体，其能够长期存在于未分裂、最终分化的细胞群中而不被细胞当做外源DNA降解，从而达到药物递送的作用。慢病毒LV载体则可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。
 

目前已上市的药物中以AAV作为载体的代表性药物例如诺华治疗脊髓性肌萎缩症（SMA）的Zolgensma，上市以来也取得了显著反向，商业化较为成功。接下来就让我们来看一下不同病毒的生产工艺吧！

01

溶瘤病毒生产工艺

病毒工艺开流程
 

02

质粒/病毒载体生产工艺

一 慢病毒质粒构建流程
 

二 腺病毒质粒构建流程
 

三 腺相关病毒质粒构建
 

在上游细胞培养过程中，培养工艺不同会导致病毒产量或质量的不同，目前对于细胞培养的工艺主要分为贴壁工艺及悬浮工艺。贴壁工艺是目前市场上主流的生产工艺，主要有细胞工厂、固定床、微载体工艺等。而悬浮工艺主要受限于细胞系和培养基，但易于放大，是较为理想的工业化生产模式。
 

胰酶作为细胞贴壁工艺中的关键物料之一，酶活性、有无动物源等因素均至关重要。逐典TryPLUS消化液作为体外重组表达的胰酶类似物，与传统胰酶的消化动力学相似，但区别与传统胰酶，具有纯度高，细胞毒性低，细胞消化温和等特点，产品无动物源性，无需胰酶抑制剂，稀释即可进行终止，并且能够兼容多种细胞培养体系，定能成为您细胞培养工艺中的绝佳帮手！