细菌内毒素中临床样品测定值的影响因素

1、对细菌内毒素活性影响
我们知道，样品中铁、铝等离子能够引起细菌内毒素活性的降低，当我们在内毒素溶液中只需加入0. 04mM的铁，0. 02mM的铝，就可引起内毒素活性下降30%左右，另外其他金属离子如Mg²⁺、Ga²⁺等也有这种影响。虽然这种情况对于临床样品测定影响不大，但是我们在使用内毒素标准品稀释过程及测定时要引起注意。
 

2、测定方法的影响
前面我们已经介绍，在众多鲎试验法中，作为临床体外诊断试剂许可的常用内毒素测定法，主要是微量定量的比浊时间分析法和合成基质法两种。

1.比浊时间分析法
系根据LAL/TAL试剂与内毒素反应所形成的浊度变化作为指标的一种手段，因此它很容易受到样品中的浊度影响。但是我们知道，测定中没有绝对的浊度值，由于是以变化率作为指标，因此在有浊度的样品中进行测定时，反应过程中不受没有非特异性浊度变化的情况是不可能的，另外，使用表面活性剂的稀释加热法，可使测定过程中的非特异浊度变化减轻。今后，人们期待着开发能够避免非特异浊度变化影响的前处理方法和测定方法。

2.合成基质法
是以LAL/TAL试剂凝固酶肽合成基质水解作为指标和分析方法，分为终点比色法和动态比色法。在终点比色法中，由于测定分离PNA的对销基苯胺的黄色(405nm)或偶氮化后的红色(545nm)，因此要注意胆红素等黄色物质共存的影响以及各种磺胺类制备对红色的假阳性影响。

3.血浆成分的影响
血浆中的抗凝血酶Ⅲ，a₂纤维蛋白溶酶抑制剂等对LAL试剂中的凝固酶存在干扰作用，为了去除这些影响，人们开发出了各种前处理方法。另外血中还存在着对测定产生影响的各种各样内毒素结合物质，如：甘油三酯核糖蛋白，高密度核糖蛋白(HDL)及低密度核糖蛋白(LDL)LBP、BPI等，这些物质也会干扰鲎试验测定。这些物质的影响可以考虑为对内毒素活性干扰作用。这些物质在反应液中存在时，就有可能抑制内毒素的活性，但是在使用酸处理或加热处理测定血中的内毒素时，这些蛋白性的内毒素结合物质变性的可能性很强。因此，我们在测定时要引起注意。
 

4.我国发展现状
到目前为止，国外对于血中的微量细菌内毒素测定一般均采用定量的动态比浊法和比色法，用于临床的诊断及研究也十分普遍，而且均具有专门的试剂盒。国内由于在定量方法上的研究起步较晚，加之定量比色试剂也刚刚开发出来，因此在临床上的研究还刚刚开始。虽然有一些单位一直进行这方面的检验工作，但几乎都是使用半定量凝胶法，加之血液前处理方法的使用也各不相同，因此各个单位之间数据参差不齐，无法比较。故建立标准化前处理方法以及测定方法才能准确检测血中内毒素，为临床的早期诊断提供理论依据。

相信在不远的将来，内毒素的含量测定将在临床检验领域得到快速发展和应用。