免疫组化技术专题第5期：抗原修复液PH值、温度和时间的选择

通过免疫组化技术专题前几期的内容，我们知道常规石蜡切片标本做免疫组化实验是需要做抗原修复，这就要用到抗原修复液，因为抗原修复液会直接影响抗原修复效果，本期就跟大家一起探讨抗原修复液的PH值、温度和时间等，该如何选择。

抗原修复液的pH值的选择
1、首先我们知道没有一种抗原修复液能适合于所有的抗体，因为不同pH的抗原修复液其pH比化学成分对抗原修复起到作用更大，虽然多数抗体在抗原修复液全范围pH均能使抗原决定簇进行有效修复，但针对性选择不同pH的修复液，效果会更佳。常见抗原修复液如下：

2、常用的0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)对大多数抗原来说并不是最好的修复液，如进行 ER染色时，用pH7.0比pH6.0要好。

总体看：大部分组织抗原适合的修复液应接近活体细胞的pH(7.0~7.4)。

抗原修复液的温度和时间选择
相较于修复液的种类和pH，对抗原修复影响更大的因素是修复液的温度和时间。建议温度保持在95℃作用时间为15~20分钟。反之温度或时间不够会使染色强度大幅度减弱，甚至呈现阴性结果，影响切片结果的诊断。

温馨提醒
染色失败应主要从抗体质量及操作中找原因。光密度值0.03以下在光镜下看不到棕色颗粒，这些小数值的出现可能是显色液中 DAB在背景中沉着所致。

石蜡切片首选
瑞沃德轮转式（石蜡）切片机S71

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【参考文献】
病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越，陈军主编.人民卫生出版社