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ELISA标本的处理及保存步骤

浏览次数:438 发布日期:2022-11-15  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时,受检标本(测定其中的抗原)与固相载体表面的抗体反应。以下来一起了解ELISA标本的处理及保存:

一、ELISA标本的处理

1.血清:室温血液私人凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,如有沉淀形成,应再次离心

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成分时,用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清,检测细胞内的成分时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右,通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成分。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷冻保存备用,标本融化后任然保持2-8°C的温度,加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,分装后一份待检测,其余冷冻备用,

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行试验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20°C保存,单应避免反复冻融。

二、ELISA标本的保存:

一般来说,再5天内测定的血清标本可放置于4°C,标本再冰箱中保存时间过长会导致血清IgG聚合,是间接法的试剂本底加深,超过一周测定的需-20°C保存,冻结血清溶解后,蛋白质局部浓缩,分不均,应充分混匀并避免产生气泡。

1、浑浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。

2、测抗体的血清的标本如需保存作多次检测,以少量分装冰存,

3、保存血清只采集是就应注意无菌操作,也可加入适当的防腐剂,抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性,建议劲量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。

发布者:上海博湖生物科技有限公司销售部
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