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关于鲎试验法中假阳性结果的解决方法

浏览次数:1165 发布日期:2022-11-11  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

样品中混入细菌内毒素发生凝集,由形成凝胶的有无来检测样品中的内毒素,然而鲎试剂除了内毒素反应外,它同时也会对内毒素以外的其他物质存在凝集反应。因此,势必会形成假阳性或假阴性的实验结果。这就是鲎试验法中的特异性问题。

对于假阳性结果的问题,可以说十分复杂。因为对于大多数样品来说,主要都为假阴性情况较多,而对于假阳性结果的判断和排除是很困难的。当我们对一个样品用鲎试验法检测出阳性结果时,一可以说是由于内毒素超过限值所引起,二也可以理解为假阳性结果。因此我们在实验时要特别注意区分。

 

在假阳性结果的研究过程中,最突出的是有关G因子反应系被激活所形成的凝胶化反应,即一般的鲎试剂由于含有G因子也可被(1,3)-β-D-glucan(葡聚糖)所激活而使产生凝集反应,从而形成假阳性结果。

关于(1,3)-β-D-glucan:它是在1981年由Adinuma所发现一种抗癌药,能使鲎试剂产生凝固。国外报道该物质在10ng/ml时就可使鲎试剂凝固。根据我们的试验发现不同厂家的鲎试剂可在2.5 ~10ng/ml范围内使鲎试剂凝固。该物质广泛存在于担子菌、真菌、地衣类、酵母和藻类的菌体成分中。另外,某些用人造纤维造的人工肾透析膜上也含有类似物质,但它可引起家兔升温。

(1,3)-β-D-glucan对热极为稳定。高压121℃并不能使其灭活。需250℃2小时加热灭菌才能使其灭活。因此,要想防止假阳性结果的产生,就必须要排除(1,3)-β-D-glucan,使其不能激活G因子而形成凝胶。

国外在80年代后对此进行了许多的研究和改进。目前已开发出仅对内毒素起反应的专一鲎试剂。只与内毒素起反应的鲎试剂有:日本生化学工业株式会社生产的Endospecy,它是将东方鲎裂解液中各组分提取后重组,重组时不加G因子,另一种是日本和光纯药株式会社生产的ES =Ⅱ,它是美洲鲎裂解液中加入大刃羧甲基curdaln封闭G因子。同时国外也开发出只与(1,3)-β-D-glucan起反应的鲎试剂:由蚕中提取而来的新型的SLP试剂。(和光)以及日本化学工业株式会社生产的Gluspecy。

对于大多数样品来说,由于使用特异性鲎试剂与非特异性鲎试剂对其结果是没有差异的。因此在一般情况下可以不必考虑,只有在确实认定有干扰时,才考虑使用特异性鲎试剂以排除干扰。


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