简单且高效免疫荧光实验方法
在本应用介绍中，我们将描述在通道载玻片内培养大鼠成纤维细胞（Rat1）的单个实验案例。然后，我们用AlexaFluor®488鬼笔环肽染色F-肌动蛋白细胞骨架，并用DAPI对细胞核进行复染。
该实验包括四个主要步骤：
细胞培养，固定,渗透和封闭，染色，成像
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在无菌条件下打开μ-Slide I ibiTreat（80106）并将其放在μ-Slide架（80003）上。将100μl 3×10 5 细胞/ ml Rat1细胞悬浮液加入通道中。如下图所示直接加入通道。
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用提供的盖子轻轻地盖住储液器。不要完全关闭它们。
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将架子放入培养箱（37°C; 5％CO2）中，让细胞附着（60分钟）。然后用0.5ml无细胞培养基填充两个储库。
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培养过夜。
固定渗透和封闭:
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通过使用细胞培养抽吸装置或移液管从储库中吸出整个培养基。用Dulbecco's PBS洗涤细胞，缓慢地将1ml液体施加到一个空的储液器中，并从对面的储液器中吸出。
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使用大约200μl的3.7％paraformaldehyde固定细胞20分钟。从通道的另一侧移除储液器的液体
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如步骤5中所述，用1ml PBS再次洗涤细胞。
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使用200μl0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分钟。
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施加200μl1％BSA 溶液封闭20分钟。
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用PBS洗涤细胞。
染色：
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从通道中清除所有液体，吸出液体后，不要让通道干燥。
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用100μlAlexaFluor®488鬼笔环肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA，InvitrogenCorp.）在室温下培养20分钟。
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用PBS洗涤细胞并吸出通道液体。
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用100μlDAPI（0.1μg/ ml，Sigma-Aldrich）培养3-5分钟。
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用PBS洗涤细胞并吸出所有液体。用滴管瓶注入100μl Ibidi安装介质。用提供的盖子盖住储液器。μ-Slide可以存储大约4周。
成像：
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在荧光显微镜下选择适当的滤镜，也可以使用浸油观察细胞。
Rat1细胞;
绿色：F-肌动蛋白细胞骨架; 蓝色：核
（Zeiss Axiovert 135；Plan-NefLoar 100x／1.3）
我的实验应该使用哪种载玻片？
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