近红外Western Blot实验需要关注的5个重点

化学发光Western Blot的流程大家再熟悉不过，近红外荧光Western与化学发光步骤基本相似，但是有些小伙伴做不好荧光Western，小编给大家总结了做荧光Western的几点注意事项：

一、做近红外荧光Western选择低荧光背景膜，降低膜对信号的影响。

二、选择合适的封闭液，没有一种封闭液适用所有的Western Blot检测，需要大家进行优化，如果做磷酸化蛋白检测，不建议使用牛奶为基础的封闭液，如果做酪氨酸蛋白，不建议使用BSA为基础的封闭液，Azure提供荧光封闭试剂，减少非特异性条带结合，降低背景。

三、漂洗也是非常重要的一步，使用干净的孵育盒，足够多的漂洗液，一般含有吐温的浓度0.1%-0.2%，如果背景特别高，加入少量的SDS可以明显降低背景，SDS添加只能用于PVDF膜，浓度一般为0.01%-0.02%。Azure提供荧光印迹漂洗buffer，减少荧光二抗的非特异性结合，从而产生高信噪比的印迹。

四、选择特异性好的抗体，两种一抗必须来自不同的宿主，才能被不同特异性的二抗所识别。Azure提供荧光标记试剂盒，荧光Western Blot实验试剂盒和近红外二抗，满足客户的需求。

五、近红外荧光印迹膜的成像，需要成像仪器具有近红外荧光光源，现在进行近红外染料激发最好的激光光源，Azure Imager和Sapphire都采用的激光光源，具有激发强度大，单色性好，信噪比高，背景低等特点。

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