细胞污染鉴定方法有哪些呢

由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。
在发现培养的细胞出现生长异常时需要对细胞的污染情况进行鉴别，以利于采取补救措施。常见的污染鉴别方法如下：

1、细菌、真菌污染的检测

（1）肉眼观察

细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。

（3）接种观察

采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。

（2）镜下观察

在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。

若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。

2、支原体污染的检测

（1）相差显微镜观察

直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。

应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。

（2）荧光染色法观察

用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。

（3）电镜检测

若条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。

（4）培养检测

将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。

3 、病毒的检测

1) 应用电镜技术快速诊断动物病毒病

冠状病毒电镜图：

2) 逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒