如何巧妙提高外周血培养成功率

浏览次数：3070　发布日期：2019-9-25　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

人体外周血淋巴细胞培养搭配染色体核型分析技术是诊断染色体变异的重要手段。淋巴细胞的培养是染色体标本制备的关键。培养基的选择、秋水仙素的用量及时间、温度、pH，固定、滴片等其中任何一点处理不当，就极有可能导致实验失败。本期专题，我们就聊聊 “外周血淋巴细胞培养，如何简化操作、做好细节、提高细胞培养成功率？”

“ 一管到底 ”简化操作，提高效率

外周血培养时间长，过程复杂，因此我们建议采用 “一管到底” 的方法，用离心管代替培养瓶，省去了敲除培养瓶盖的步骤，也无需转移细胞悬液，杜绝了常规法中潜在的交叉风险，简化操作流程，提高了效率。

外周血培养，还要注意这些

1. 接种的血样愈新鲜愈好，最好是在采血后24小时内进行培养，若不能立刻培养，应置于4℃存放，避免保存时间过久影响细胞活力。

2. 秋水仙素是使细胞停止在中期的关键，因此使用秋水仙素的质量很重要，勿使用来源不明的厂商产品。

3. 使用的低渗液、固定液需要现用现配，避免低渗作用，细胞固定效果不佳，无法收获完美染色体。

4. 收获细胞时，吸取上清液时动作要轻，临近底部要注意吸取的动作，否则易把培养的细胞吸出。每次吸取上清液都要在管的底部留上大约1mL的上清 , 以确保培养细胞的数量。当最后一次加入固定液后，要用力充分混匀，防止细胞粘连在一起而影响下面步骤的顺利进行。

5. 滴片是染色体制备中影响染色体形态的关键一步，首先是滴片用的玻片要非常干净，冰冻4h以上，即为冰片，滴片时现用现拿，如果冷冻不够，细胞难以贴附在玻片上，会影响染色体的分散和分带效果。滴片时也要注意保持滴管与玻片距离，一般控制在20 ～30cm ,而且滴的顺序要呈S型，让其尽可能滴匀。然后用嘴或吸耳球轻轻混匀，最后在酒精灯上快速划过几次，确保细胞确实固定好。

6. 此外，培养基的保存很关键，若不是马上使用，需放入0℃下保存，防止药品失活。

BI外周血淋巴细胞培养基

BI在 ”一管到底“ 方法的基础上，采用带有顶胶塞的试管，加样无需开盖，细胞培养和染色体制备在同一管中进行，操作方便，避免污染。

HEPES缓冲体系适用于封闭式细胞培养。

为确保培养基质量，采用高品质胎牛血清