如何选择蛋白印迹实验中的印迹膜

硝酸纤维素膜（NC膜）是蛋白和核酸杂交最常用的印迹膜，是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，虽然这其中的机制还不是十分清楚，但由于硝酸纤维素膜的这个特性，而且易于封闭非特异性结合，从而得到了广泛的应用。目前市场上的NC膜产品数量众多，品质参差不齐。

从膜的质地上来看，最重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关，市场上有些硝酸纤维素膜通常会还有大量的醋酸纤维素，因而降低了蛋白的结合量。如果采用的是100%纯度的硝酸纤维素，保证了最大的蛋白结合量，可达80-150μg/cm2。Sartorius的NC膜是致密的 100% 硝酸纤维素滤膜，是用于Western、Northern和Southern杂交的优良滤膜。由于100%的纯度，因而也大大减少了非特异性的结合，降低杂交背景，保证最大的蛋白结合量，可达150-200μg /cm2。除此之外，Sartorius的NC膜质的精良，具有良好的韧性与强度。相比传统的NC膜质地比较脆，漂洗一两次就会破损，Sartorius的NC膜的优势就凸显了出来，既能反复使用，又不易破损，是Western、Northern和Southern杂交实验的最佳选择。

从膜的选择上来看，根据被转移的蛋白分子量大小，要选择不同孔径的硝酸纤维素膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。因此，我们通常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤维素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如果用0.45μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象。Sartorius的NC膜也有两种可供选择，几乎能够涵盖大多数用户的需求。孔径为 0.2 µm 的硝酸纤维素膜推荐用于转印小分子蛋白和核酸，能避免由于膜转移而导致的样品损失；孔径为 0.45 µm 的硝酸纤维素膜推荐用于转印大分子蛋白和核酸以及大多数分析型印迹，包括蛋白ssDNA 和 RNA 转印。

从膜的使用上来看，市场上的NC膜有需要预处理才能使用的，也有不需要预处理可直接使用的。Sartorius的NC膜不需要经过无水甲醇预处理，膜仅需要在水中简单润湿，而后放入转移缓冲液中。简单操作就可以放心使用。

因此, Sartorius的NC膜是相关杂交科研实验的理想选择。

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